ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИКИ НЕКОТОРЫХ БЕЛКОВ ПОСТРЕПЛИКАТИВНОЙ РЕПАРАЦИИ ДНК В КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПОСЛЕ ОБРАБОТКИ КАНЦЕРОГЕНАМИ

Аннотация:

Многие повреждения в матричных нитях ДНК блокируют основные репликативные ДНК-полимеразы и вызывают блокировку продвижения репликативных вилок. Этот блок может быть преодолен при помощи особых ДНК-полимераз (например, ДНК-полимеразы n), или РоIn), способных осуществлять синтез на поврежденной матрице ДНК. Пострепликативной репарацией ДНК (ПРР) называют механизмы, позволяющие завершить раунд репликации ДНК даже в присутствии повреждений в матричной нити. В дрожжах Saccharomyces cerevisiae основным регулятором безошибочной и мутагенной ПРР является белковый комплекс Rad6 - Radl8, который убиквитинирует белок PCNA. В клетках млекопитающих РоIn накапливается в заблокированных фокусах репликации, однако механизм этого накопления неизвестен. РоIn имеет консервативный блок связывания с PCNA, и фосфорилирование этого блока может быть существенным для ее взаимодействия с PCNA. Ранее мы показали, что ингибитор протеинкиназ стауроспорин подавляет ПРР в клетках человека. В настоящей работе мы проверяли гипотезу о том, что причиной накопления РоIn после повреждения ДНК в заблокированных фокусах репликации является ее фосфорилирование, а также исследовали индуцированное повреждениями ДНК фосфорилирование белка hRadl8 (human Radl8), конъюгированного с зеленым флуоресцентным белком (GFP), и его накопление в репликативных фокусах. Полученные результаты указывают на следующее: 1) Polrj не фосфорилируется в ответ на УФ-облучение или обработку клеток метилметансульфонатом (ММС), однако ее диффузионная мобильность в ядре несколько уменьшается во время ПРР; 2) белок hRadl8 накапливается в клетках, обработанных ММС, причем значительная его часть колокализуется в заблокированных фокусах репликации с нерастворимым в детергенте PCNA; накопление hRadl8 в клетках после действия ММС подавляется стауроспорином. На основании этих данных можно сделать предположение о том, что чувствительным к стауроспорину этапом ПРР является фосфорилирование белка hRadl8.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2004
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2004.-N 1.-С.43-52
Просмотров: 68