ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИЗОЛЯТОВ ВИЧ, ВЫЯВЛЕННЫХ НА ТЕРРИТОРИИ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

Аннотация:

На основании изучения 26 штаммов вируса в культуре клеток представлены данные по характеристике
биологических свойств штаммов ВИЧ, циркулирующих на территории Республики Беларусь. Показано,
что по репликативной активности, инфекционности, тропизму к определенным линиям клеток все штаммы можно разделить на 2 группы: высокоинфекционные и низкоинфекционные. Низкоинфекционные
штаммы ВИЧ были изолированы как от бессимптомных пациентов с лимфаденопатией, так и от больных
СПИДом. В то же время 2 высокоинфекционных штамма получено от пациентов без клинических признаков СПИДа через 6-8 мес после предполагаемого инфицирования.
Характерным признаком вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) является его высокая генетическая вариабельность. Секвенирование геномов
изолятов ВИЧ показало, что существуют различия
не только среди вирусов, выделенных на разных
географических территориях, но даже среди штаммов ВИЧ, изолированных от одного и того же пациента [1].
Принято считать, что ВИЧ существует в виде
быстро изменяющихся квази-видов (quasi-species)
[4, 5]. Именно высокая генетическая вариабельность обусловливает различия штаммов ВИЧ в
клеточном тропизме, репликативных и цитопатических свойствах, а также в чувствительности к нейтрализующим антителам. В настоящее время интерес к выделению и изучению биологических
свойств ВИЧ все более возрастает. Это связано с
тем, что на фоне интенсивных поисков противовирусных соединений и отработки новых схем лечения ВИЧ-инфицированных и больных СПИДом с
использованием одновременно нескольких соединений, обладающих выраженной анти-ВИЧ активностью, появились сообщения об изоляции вируса,
резистентного к препаратам ряда нуклеозидов [3].
В настоящей работе представлены данные по
характеристике биологических свойств штаммов
ВИЧ, выделенных от жителей Беларуси за 19871993 гг.
Материалы и методы
Изоляция ВИЧ. Выделение вируса проводили по
методу [8] с небольшими, описанными ниже, модификациями. С этой целью использовали лимфоциты периферической крови пациентов (19 вирусоносителей и 7 больных СПИДом). Выделенные в
градиенте верографина лимфоциты обрабатывали в
течение 24-48 ч фитогемагглютинином (10 мкг/мл)
и сокультивировали с донорскими лимфоцитами в
соотношении 1:1. Сокультивированные клетки вели
на среде RPMI-1640 с 10% эмбриональной телячьей
сыворотки, 10 мМ HEPES, 0,06% L-глутамина и
50-100 мкг/мл гентамицина в присутствии интерлейкина-2 (20 Ед/мл) или полибрена (0,2 мкг/мл).
Последний вносили лишь на 1 ч, после чего культуру отмывали. Через каждые 3-4 дня добавляли
свежие донорские клетки, предварительно активированные фитогемагглютинином. После 2-4-недельного культивирования в полученные лимфоцитарные культуры вносили клетки одной из перевиваемых Т-клеточных линий и проводили последующее пассирование в течение 6-12 мес.
Культуры клеток. В работе использовали перевиваемые Т-лимфоидные линии клеток МТ4, Molt
4/8, CEM-SS, СЕМ, С8166, Jurkat-tat III и Н9. Состав питательной среды описан выше. Жизнеспособность клеток определяли окрашиванием 0,5%
раствором трипанового синего.
Непрямая иммунофлюоресценция (НИФ). Для выявления вирусспецифических внутриклеточных антигенов ВИЧ использовали поликлональную сыворотку
крови ВИЧ-инфицированного пациента. Моноклональные антитела к белку р24/р25 представлены докторами Susan A. Stem и Martha F. Matocha (National
Institute of Allergy and Infectious Diseases, США). В работе также использовали кроличьи анти-человеческие иммуноглобулины, меченные флюоресцеина
изотиоционатом и сухой бычий альбумин, меченный
родамином (производство НИИ эпидемиологии и
микробиологии им. Н. Ф. Гамалеи, РАМН).
Выявление внеклеточных антигенов ВИЧ проводили на коммерческой тест-системе "Abbott" (США).
Обратнотранскриптазную активность определяли по методу [10].
Электрофорез осуществляли в 10-12% СДСПААГ по методу [7].
Электронно-микроскопические исследования проводили по общепринятой методике на фиксированных 2,5% глутаральдегидом и 1% 0s04 клетках,
обезвоженных в спиртах возрастающей концентрации и заключенных в аралдит.
Выделение ДНК осуществляли в соответствии с
известным методом [2].
Полимеразную цепную реакцию с парами праймеров gag и env гена ВИЧ-1 и ВИЧ-2 проводили по
ранее описанному методу [9].

Авторы:

Издание: Вопросы вирусологии
Год издания: 1998
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.113-117
Просмотров: 88