АНТИГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ КОРЕВОГО ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩЕГО КОМПЛЕКСА

Аннотация:

Применение липосомальной технологии получения иммуностимулирующего комплекса позволило получить коревой комплексный препарат, антигенность которого представлена структурными белками вируса кори, включенными в бислойную фосфатно-липидную мембрану. Иммунизация мышей иммуностимулирующим комплексом вируса кори индуцировала коревые антитела: максимальный титр антигемагглютининов 1:640 и антигемолизинов 1:1280. Биологическая активность антител была подтверждена в реакции нейтрализации.
Заболеваемость корью среди привитых живой
коревой вакциной Л-16 и возросшее в последние
годы число детей с первичными и вторичными
иммунодефицитными состояниями [3, 4] свидетельствуют о необходимости создания новых эффективных вакцинных препаратов, лишенных недостатков живых вирусных вакцин.
При разработке "убитой" коревой вакцины,
спосообной индуцировать иммунный ответ, подобный тому, который возникает при естественном заражении, одним из перспективных направлений может быть использование иммуностимулирующего комплекса (ИСКОМ).
Экспериментальными работами зарубежных
авторов показано, что наличие и сохранность поверхностных белков вируса кори в вакцинных
препаратах является основным условием формирования протективного иммунитета [8, 10, 11].
Однако, несмотря на интенсивные исследования,
проводимые в ведущих лабораториях мира, изучение и обоснование состава иммуногенного комплекса как основы коревой вакцины далеки от завершения. Основная трудность, с которой сталкиваются специалисты, -это слабая антигенная активность поверхностных антигенов вируса кори.
Целью данной работы явилось создание коревого ИСКОМ с применением липосомальной технологии на основе авторского штамма вируса кори БУК, активно продуцирующего вирусный гемагглютинин.
Материалы и методы
В работе использовали авторский штамм вируса кори БУК (патент № 5040659), выпущенный в
1990 г. от больного корью. Накопление вируса
проводили в перевиваемой культуре клеток Vero:
2-3-дневный монослой клеток заражали вирусом
крови из расчета 1 ЦПД на клетку. Клеточную
культуру при 70-80% вирусном поражении снимали и использовали для получения поверхностных антигенов.
Выделение мембранной цитоплазматической
фракции, содержащей поверхностные белки вируса кори, с зараженных клеток проводили неионными детергентами [5]. Для этого инфицированные клетки отмывали центрифугированием в забуференном физиологическом растворе (ЗФФ) рН
7,2, затем ресуспендировали в буфере, содержащем 0,1 М NaCI, 0,01 М трис-HCI, 0,001 М ЭДТА,
0,5 дезоксихолата натрия, 1,5% октилглюкопиранозида натрия. Экстракцию проводили при комнатной температуре в течение 20 мин и центрифугировали взвесь лизированных клеток при 3000 об/мин
10 мин. Супернатант, содержащий цитоплазматическую фракцию, использовали для дальнейшей
работы.
Концентрацию белка в полученной фракции
определяли по методу О. Lowry [7]. Наличие поверхностных белков в антигенном материале -в
полиакриламидном геле (ПААГ) по U. Laemmii
[6]. Количественную оценку содержания вирусспецифических и клеточных белков проводили
путем сканирования белковых, полос геля в сканизующем спектрофотометре "Beckman" (США)
при длине волны 490 нм.
Гемагглютинирующую активность (ГА) определяли в реакции гемагглютинации по Е. Norrby с
0,5% взвесью эритроцитов обезьян [9].
Приготовление ИСКОМ проводили модифицированным методом P. de Vries [II]. В бислойную мембрану, представленную холестерином и
фосфатидилэтаноламином (Sigma, США) в соотношении 1:2 включали антигенную фракцию с добавлением 0,02% (масса/объем) адъюванта Owil A ("Spicoside", "Iscoside", Швеция) и диализовали против
ЗФР рН 7,2. Структуру полученного ИСКОМ исследовали в световом микроскопе при 8600-кратном
увеличении. Подготовку опытных образцов для микроскопирования осуществляли по методу [1].
Иммуногенные свойства полученных комплексных и контрольных препаратов оценивали на
мышах линии BALB/c при однократной иммунизации: ИСКОМ в дозах 7 и 14 мкг специфического
антигена (1-я и 2-я группы); антиген 14 мкг + адъювант Фрейнда (3-я группа); антиген 7 и 14 мкг контрольные (4-я и 5-я) группы. Все препараты
вводили внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл.

Авторы:

Издание: Вопросы вирусологии
Год издания: 1998
Объем: 3с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.127-129
Просмотров: 89