МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К ПОДКЛАССАМ lgG ЧЕЛОВЕКА: ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ

Аннотация:

lgG человека представляет собой совокупность
молекул 4 подклассов: lgGI, lgG2, lgG3 и lgG4,
которые различаются по антигенной структуре и
спектру биологических функций [9, 20, 24]. Показано, что в ответ на разные по химической природе антигены синтезируются преимущественно антитела того или иного подкласса [16, 23]. Неодинакова роль lgG отдельных подклассов в формировании защитных иммунных реакций и в иммунопатологических процессах [1, 16, 18, 23]. Идентификация lgG каждого из подклассов основана
на антигенных различиях. Однако степень структурной гомологии этих белков составляет от 85 до
95% [20, 23], что осложняет получение строго специфичных и стандартных иммунохимических реагентов. В последнее десятилетие для решения
этой проблемы создают панели моноклональных
антител (М КАТ), распознающих антигенные детерминанты, характерные для каждого из подклассов lgG [14, 15, 17, 21]. Цель настоящей работы состояла в получении МКАТ такого рода и исследовании их специфичности.
Методика исследований. Антигены. Источником моноклональных lgGI, lgG2, lgG3 и lgG4 служили сыворотки пациентов с множественной миеломой. Идентификацию и оценку содержания парапротеинов в сыворотках проводили методом
встречной иммунодиффузии с помощью моноспецифических
сывороток, приготовленных в лаборатории гуморального иммунитета Московского НИИ эпидемиологии и микробиологии
им. Г. Н. Габричевского. Обогащенные парапротеинами препараты получали путем повторных осаждений глобулиновой
функции сыворотки раствором сульфата аммония [71 с убывающей концентрацией (от 50 до 25% насыщения). В работе
были также использованы препараты поликлональных lgGI,
lgG2, lgG3, lgG4, lgM и lgA человека ("Calbiochem"). Легкие
цепи эе-и ^-типа были выделены с помощью ионообменной
хроматографии на DEAE-целлюлозе ("Serva") из белковой
фракции мочи пациентов с множественной миеломой [22],
lgG, несущие наборы аллотипических маркеров, были любезно
предоставлены проф. Р. Джефферисом и доктором Г. де Ланге.
Схемы иммунизации животных представлены в табл. 1. Во
всех экспериментах использовали мышей-самцов линии SJL/J
в возрасте 2-3 мес. При первичной иммунизации антигены
включали в состав полного адъюванта Фрейнда и вводили в
подушечки задних лап в дозе от 5 до 50 мкг на мышь. Повторно антиген инъецировали в составе неполного адъюванта под
кожу спины. В ряде экспериментов антиген присоединяли к
носителям: бычьему сывороточному альбумину или к гемоцианину с помощью глутаральдегида [4], к аминобензил-целлюлозе ("Servacel РАВ"-23) по методике, описанной А. Е. Гурвичем
[3], или к липополисахариду (ЛПС) из Е. coli 055, предварительно активированному перйодатным окислением (4]. При
сочетании активной и пассивной иммунизации антиген вводили через 2-4 ч после внутрибрюшинной инъекции мышиных
моноклональных или поликлональных антител. За 4 сут до получения иммунных лимфоцитов животным вводили внутрибрюшинно антиген в физиологическом растворе в дозе 5 мкг
на мышь двукратно с интервалом 48 ч. Через 48 ч после второй
инъекции получали взвеси клеток селезенки (в некоторых
опытах -также клетки паховых и подколенных лимфоузлов).
Получение гибридом ч МКАТ. Лимфоциты иммунизированных
мышей гибридизировали с культивируемыми клетками мышиной
миеломы 653.А [6]. Методы культивирования, селекции и клонирования гибридом описаны в работах [2, 61. Клонированные культуры, синтезирующие МКАТ, прививали в дозе 5-10^ клеток
внутрибрюшинно мышам-гибридам (BALB/c х SJL/J)F[ через
10-14 дней после инъекции пристана. Асцитные опухоли развивались на 7-21-й день. Обогащенную МКАТ глобулиновую
фракцию получали из асцитической жидкости путем двукратного осаждения полунасыщенным раствором сульфата аммония [7]. Очистку МКАТ проводили хроматографией на белокА-сефарозе [5].

Авторы:

Издание: Иммунология
Год издания: 1998
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.27-31
Просмотров: 55