ЭФФЕКТИВНЫЙ МЕТОД ОЧИСТКИ ДНК ИЗ ЗАГРЯЗНЕННЫХ ОБЪЕКТОВ И ОПТИМИЗАЦИЯ АМПЛИФИКАЦИИ

Аннотация:

Предложен способ выделения и очистки ДНК из сильнозагрязненных предметов-носителей. Он включает: 1) стандартную обработку биоматериала протеиназой К с последующей фенол-хлороформной экстракцией; 2) освобождение от катионов на смоле лауэкс-50W и ниэкомолекулярных примесей гель фильтрацией на сефадексе G-50. Синтезированы модифицированные олигонуклеотидные праймеры и оптимизированы условия амплификации для двух variable namber of tandem repeats (VNTR) локусов аполипопротеин В (ароВ) и D17S5, широко применяющихся при ДНК-типировании человека с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). Повышение стабильности и специфичности амплификации VNTR локусов ароВ и D17S5 достигнуто благодаря оптимизации длины и состава праймеров и изменения режима амплификации. Чувствительность предчоженного способа амплификации составляет 2-4 нг ДНК-матрицы. Использование условий "гнездовой" амплификации для локуса ароВ позволило добиться повышения чувствительности метода до нескольких копий ДНК мишени.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2004
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2004.-N 2.-С.211-216
Просмотров: 20