АНАЛИЗ ГЕНОМНЫХ ДЕТЕРМИНАНТ ВИРУЛЕНТНОСТИ И СОЗДАНИЕ БИБЛИОТЕКИ ПОЛНОРАЗМЕРНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ КОПИЙ ГЕНОМА АТТЕНУИРОВАННОГО ШТАММА ВИРУСА РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ СЕВЕРОАМЕРИКАНСКОГО ТИПА

Аннотация:

С целью выявления потенциальных генетических детерминант вирулентности представителей рода Arterivirus проводили сравнение первичной структуры геномов 3 вариантов североамериканского вирулентного штамма вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) NADC-8. Кроме вирулентного, исследовали аттенуированный вариант, полученный после 251-го пассажа в культуре клеток, а также промежуточный вариант, выделенный от свиньи после частичной реверсии аттенуированного вируса. Геном аттенуированного варианта приобрел 3-нуклеотидную делецию и 50 мутаций по сравнению с вирулентным предшественником. Сравнение аттенуированного и промежуточного вариантов вируса выявило 8 нуклеотидных мутаций, приводящих к замене 6 аминокислот в 3 открытых рамках считывания (ORF1a, ORF1b и ORF6). С целью экспериментальной проверки функциональной роли найденных мутаций была получена библиотека из 32 клонов в Е. coli в плазмидном векторе pACYС 77, содержащая полноразмерные копии генома аттенуированного варианта штамма NADC-8 (251) вируса РРСС. На основе клонированной ДНК были получены in vitro полноразмерные аналоги (+-цепи РНК) вирусного генома, содержащие КЭП-структуры и полиаденилированные. Из 8 проанализированных клонов 7 копий вирусного генома оказались инфекционными и их введение в клетки MARC-145 привело к получению инфекционных вирусов РРСС; 4 полученных рекомбинантных вируса имели сниженные ростовые характеристики, а 3 были схожи с родительским штаммом. Данная технология (обратная генетика) позволит вносить изменения в вирусный геном для проведения прикладных и фундаментальных исследований артеривирусов.

Авторы:

Издание: Вопросы вирусологии
Год издания: 2004
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2004.-N 3.-С.56-63
Просмотров: 58