СЕЛЕКЦИЯ ШТАММОВ Е. COLI, ПРИГОДНЫХ ДЛЯ СТАБИЛЬНОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ РЕКОМБИНАНТНЫМИ ПЛАЗМИДАМИ, СОДЕРЖАЩИМИ ПОЛНЫЙ ГЕНОМ КЛИНИЧЕСКИХ ИЗОЛЯТОВ ВИЧ-1

Аннотация:

Из исходного штамма Е. coli х5097 получен штамм x6007, являющийся результатом мутации ptsH5, позволяющей клеткам расти в отсутствие общих компонентов фосфоенолпируватзависимой фосфотрансферазной системы. Сегреганты штамма х6007, которые сохранили ген Pol+ (именно с этим геном принято связывать неспособность к росту при 37°С), но приобрели устойчивость (Rif R) к действию антибиотика рифампицина, использовали для клонирования коинтегративных плазмид. Для клонирования получали преинтеграционные комплексы ВИЧ-1, проводили их коинтеграцию с плазмидой pBR-322 и трансформировали штамм х6018. После секвенирования гибридной плазмиды рРIС91 показано, что она содержит полный геном ВИЧ-1 с укороченным 5'-концевым LTR и полную копию pBR322. При элиминации плазмиды рРIС91 из клеток х6018 наблюдали появление инсерционных ауксотрофных мутантов. Секвенирование области инсерции показало, что хромосомная ДНК клетки-хозяина содержит в этом участке интегрированные геномы pBR-322 и ВИЧ-1.

Авторы:

Издание: Бюллетень экспериментальной биологии и медицины
Год издания: 2004
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2004.-N 11.-С.550-554
Просмотров: 29