Детекция провирусной ДНК вируса иммунодефицита крупного рогатого скота посредством полимеразной цепной реакции

Аннотация:

Разработан набор праймеров, позволяющий посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) осуществлять детекцию провирусной ДНК вируса иммунодефицита крупного рогатого скота (ВИ КРС). В качестве мишени для праймеров был выбран короткий фрагмент гена pol ВИ КРС длиной в 101 пару нуклеотидов (п. н.), для которого известны последовательности провирусной ДНК, выделенной как из культуры клеток, содержащих ВИ КРС, так и из лимфоцитов экспериментально инфицированных животных. С помощью стандартной ПЦР ампликон ожидаемого размера детектирован в трансформированной клеточной линии тестикул КРС, содержащей провирусную ДНК ВИ КРС из изолята Florida 112, а также в плазмидной ДНК с клонированной провирусной ДНК изолята R29 ВИ КРС. Представлены и обсуждаются результаты теоретического сравнения праймеров, которые используют для выявления ВИ КРС с помощью ПЦР. Показано, что наличие некомплементарных нуклеотидов в комплексе праймер — однонитевой продукт может служить причиной ложноотрицательных результатов при детекции ВИ КРС. ПЦР-продукт длиной 1500 п. н. после проведения ПЦР с синтезированной парой праймеров, комплементарных гену env, и имеющей 100% гомологию для всех известных изолятов ВИ КРС, не был детектирован. Обсуждается проблема детекции ВИ КРС из клинического материала от экспериментально и естественно инфицированных животных.

Авторы:

Издание: Вопросы вирусологии
Год издания: 2005
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2005.-N 2.-С.38-43
Просмотров: 59