КЛОНИРОВАНИЕ И ЭКСПРЕССИЯ В Е. COLI ОСНОВНЫХ АНТИГЕНОВ TREPONEMA PALLIDUM И ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ ИММУНОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ

Аннотация:

Сифилис -венерическое заболевание, возбудителем которого является бледная спирохета
(Treponema pallidurn). Диагноз сифилиса ставится
на основе корреляции клинических данных с присутствием антител в сыворотках крови пациентов.
Инфекция, вызванная Treponema pallidum. приводит к образованию антител с различной специфичностью.
Антилипоидальные антитела. Этот тип антител
выявляется с помощью реакции связывания комплемента или микрореакции преципитации с кардиолипиновым антигеном [41]. Однако антилипоидальные антитела нередко образуются и при других заболеваниях, а также могут выявляться в сыворотках здоровых людей, что приводит к ложнопозитивным реакциям при использовании кардиолипина в качестве антигена в серологических
реакциях на сифилис.
Групповые антитрепонемальные аптители. Этот
тип антител выявляется в реакции связывания
комплемента и при цммунофсрмснтном анализе
(ИФА) на основе антигена, в качестве которого используется Treponema phagedenis биотип Reiter непатогенный, легко культипирусмый in vitro вид
трепонемы [4]. Однако, как и в случае с антилипоидальными антителами, групповые антитела образуются в результате инфицирования людей и
другими видами треионем (например. Treponema
denticola. вызывающая кариес), что также обусловливаст их выявление в сыворотках здоровых
людей. Таким образом, использование трепонемы
Рейтера в качестве антигена в серологических реакциях на сифилис в ряде случаев приводит к
ложноположительному ответу.
Специфические антитела против Treponema
pallidum. Эти антитела при использовании в качестве антигена патогенного вида Treponema
pallidum, обычно штамм Niclhols, в одном из следующих тестов [4]: в реакции иммобилизации
бледных трснонсм (РИБТ). реакции иммунофлюоресиениии (РИФ), реакции пассивной гемагглютинации (РИГА) и ИФА. Эти тесты обладают
наибольшей специфичностью и используются для
подтверждения диагноза. Однако известно, что
Treponema pallidum при длительном культивировании in vitro теряет специфические антигенные
свойства за счет антигенной конверсии исходного
штамма [4]. Наиболее распространенный метод
получения препаративных количеств антигена
Treponema pallidum -пассирование активной
культуры трепонемы в семенниках молодых кроликов с последующим ее выделением. При этом
выход антигена существенно зависит от индивидуальной чувствительности кроликов, точности
дозы инфицирования и времени вскрытия животных, а также от ряда других вероятностных процессов, что крайне осложняет стандартизацию метода получения антигена. Кроме того, в процессе
работы с зараженным материалом существует
опасность инфицирования персонала. Все эти недостатки, а также высокая себестоимость данного
метода делают актуальным получение альтернативного антигена.
Целью настоящей работы явились клонирование и экспрессия рекомбинантных белков
Treponema pallidnm в Е. coli. а также изучение их
иммунохимических свойств в сравнении с природным антигеном в ИФА.
Исходя из данных литературы, на наш взгляд,
наиболее перспективными являются белки с мол.
массами 15. 17, 42 кД (TmpA) и 47 кД [5. 6. 9, 15.
17-20]. Во-первых, эти белки являются видосиецифическими, т. е. представлены только в патогенной трепонемс (Treponema pallidum. штамм
Nichols), этиологическом агенте сифилиса и отсутствуют в непатогенных видах трепонем. Вовторых, известны носледовательности данных
белков, что существенно облегчает работу по конструированию рекомбинантных штаммов-продуцентов. В-третьих, на каждый из этих белков в
сыворотках больных сифилисом людей регистрируются антитела, что свидетельствует об их высокой иммуногенности. Кроме того, получены рекомбинантные аналоги для 3 из выбранных нами
белков -15 кД [17. 18]. 47 кД [6, 15] и TmpA [9.
19], которые, по предварительным данным, проявляют иммунологические и биофизические свойства природных антигенов.

Авторы:

Издание: Иммунология
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 4.-С.17-20
Просмотров: 82