Изучение физического статуса ДНК вируса папилломы человека

Аннотация:

Для определения физического статуса и количества копий ДНК вируса папилломы человека (ВПЧ) типа 16 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени нами совместно с лабораторией иммуногенетики НИИ физико-химической медицины Минздрава России была синтезирована контрольная ДНК, относительно концентрации которой проводилась стандартизация параметров полимеразной цепной реакции. Амплификацию полноразмерной ДНК ВПЧ проводили с использованием ДНК, предварительно выделенной из клинического материала, полученного от пациенток с подтвержденным ВПЧ-16. Полученный продукт амплификации длиной 7904 нуклеотида был предварительно клонирован в плазмидный вектор pGEM-T Easy с последующим определением его нуклеотидной последовательности. Далее фрагмент, содержащий полноразмерную последовательность генома ВПЧ, был субклонирован в плазмидный вектор pBR 322. Этот плазмидный вектор получил обозначение pBR/HPV. Для определения отношения количества копий генов Е2/Е6 был сконструирован плазмидный вектор рGЕМ-Т Easy/E6, который содержал полноразмерный ген Е6. Исследование физического статуса ДНК ВПЧ проводили у 21 женщины с подтвержденным методом ПЦР диагнозом инфекции ВПЧ-16. У 6 пациенток была диагностирована латентная форма, у 8 — клинические проявления ПВИ, у 7 — наличие цитологически подтвержденной интраэпителиальной неоплазии легкой степени (CIN I). Для определения количественного соотношения интегрированной и эписомальной форм, а также физического статуса ДНК ВПЧ-16 использовали два метода — мультипраймерную ПЦР и ПЦР в режиме реального времени. Как показали результаты, ДНК ВПЧ-16 находилась в геноме клетки только в интегрированной форме у 3 пациенток с CIN I. В то же время смешанная форма ДНК ВПЧ определялась у пациенток как с латентной формой инфекции, так и с CIN I, а также у 2 пациенток с клиническими проявлениями заболевания. Эписомальная форма ДНК вируса определялась у пациенток всех групп.

Авторы:

Издание: Вестник дерматологии и венерологии
Год издания: 2005
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2005.-N 3.-С.50-54. Библ. 5 назв.
Просмотров: 34