ИДЕНТИФИКАЦИЯ НОВЫХ СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ-ПАРТНЕРОВ ОПУХОЛЕВОГО СУПРЕССОРА TSC2 МЕТОДОМ ДВУГИБРИДНОЙ СИСТЕМЫ ДРОЖЖЕЙ

Аннотация:

Цель: идентификация новых белков-партнёров TSC2. Методы: в работе была использована DupLEX-A™ двугибридная система дрожжей, разработанная OriGene Technologies. Сконструированные «байт»-конструкты, содержащие полноразмерную форму и С-концевой участок TSC2, были проверены в тестах на экспрессию, проникновение в ядро и самоактивацию с использованием стандартного протокола DupLEX-A™ системы. Выполнен двугибридный скрининг кДНК библиотек клеток HeLa и эмбриона мыши с последующим отбором позитивных клонов методом полового слияния. Последовательности отобранных клонов идентифицированы с помощью сиквенс-анализа и поиска гомологии в базах данных. Результаты: скрининг кДHК библиотек с помощью полноразмерной формы TSC2 и его С-концевого домена позволили отобрать 102 положительных клона. Для 82 клонов методом полового слияния было подтверждено наличие взаимодействия. В результате проведенного анализа последовательностей были идентифицированы уже известные, а также новые белки-партнёры TSC2. Выводы: с помощью дрожжевой двугибридной системы были найдены новые партнеры TSC2, представленные белками цитоскелета, различными сигнальными молекулами, а также белками, регулирующими клеточную адгезию. Также нами было показано наличие взаимодействия между TSC2 и некоторыми изоформами белков семейства 14-3-3, что в свою очередь подтверждает достоверность обнаруженных взаимодействий TSC2 с вышеуказаными белками.(Статья на английском языке)

Авторы:

Издание: Экспериментальная онкология
Год издания: 2005
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2005.-N 3.-С.186-190
Просмотров: 41