ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ЦИТОХРОМОВ b5 С Р450САМ С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА ОПТИЧЕСКОГО БИОСЕНСОРА И КОМПЬЮТЕРНОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ

Аннотация:

С помощью оптического биосенсора исследовано в режиме реального времени образование и распад комплексов цитохрома Р450сат (Р450сат) с полноразмерным цитохромом b5 (d-b5) и его трипсиновым водорастворимым фрагментом (t-b5). Показано, что t-b5 может образовывать комплекс с Р450сат, в то время как d-b5 комплексов с Р450сат не образует. Показано участие аминогрупп Р450сат в комплексообразовании с t-b5. Измерена температурная зависимость образования комплексов t-b5im/P450cam в диапазоне 15-40°С. Константа скорости образования (кпп) комплексов t-b5/P450cam растет с ростом температуры, а константа скорости распада комплексов не меняется. Сделан вывод о том, что гидрофобные взаимодействия играют ведущую роль в комплексообразовании на стадии их образования, а электростатические взаимодействия вносят существенный вклад в стабилизацию комплексов. Из полученных температурных зависимостей рассчитаны энергии активации реакций образования и распада комплексов, энтальпия и энтропия комплексообразования. Показан решающий вклад энтропийной составляющей в реакцию комплексообразования. Выполнено компьютерное моделирование белок-белковых взаимодействий в системах P450carn/t-b5 и P450cam/ d-b5. С помощью метода молекулярного докинга получены гипотезы белок-белковых комплексов и отобраны лучшие с точки зрения геометрической комплиментарности, расчетной энергии взаимодействия и вероятности переноса электронов между белками. Компьютерное молекулярное моделирование показало, что стабильный комплекс может образовываться только в случае пары P450cam/t-b5, но не P450cam/d-b5. Согласно этим расчетам в образовании виртуального комплекса участвуют следующие аминокислотные остатки Р450сат: Q69, R72, Е73, Е76, R79, Н80, Р106, Q108, R109, R112, А113, N116, Q117, М121, Р122, D125, Д283, Y305, R330, Q343, К344, Н347, Н352, G353, S354, L356, Q360, Н361, R364. Результаты моделирования хорошо согласуются с экспериментальными данными, полученными с помощью оптического биосенсора.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2005
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2005.-N 5.-С.501-512
Просмотров: 26