СТРУКТУРА И СТАБИЛЬНОСТЬ ГЛУТАМИНСВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА ИЗ Escherichia coli И ЕГО КОМПЛЕКСА С ГЛУТАМИНОМ

Аннотация:

В работе исследованы конформационные изменения глутаминсвязывающего белка из Escherichia coli (GlnBP) под действием гуанидингидрохлорида (GdnHCl) и влияние комплексообразования GlnBP с глутамином (Gin) на эти процессы. Исследования выполнены методами собственной УФ-флуоресценции белков, флуоресценции АНС, кругового дихроизма (КД) в дальней и ближней УФ-областях спектра. Интерпретация экспериментальных данных проведена с учетом результатов анализа микроокружения триптофановых и тирозиновых остатков. Это позволило объяснить незначительный вклад тирозиновых остатков в суммарную флуоресценцию нативного белка, сходство флуоресцентных характеристик GlnBP и GlnBP/Gln и необычный эффект превышения интенсивности триптофановой флуоресценции (длина волны регистрации 365 нм) при возбуждении светом с длиной волны 297 нм по сравнению с флуоресценцией при возбуждении светом с длиной волны 280 нм. Этот эффект объяснен спектральной зависимостью относительного вклада Тгр 32 и Тгр 220 в поглощение белка. Показано, что зависимость триптофановой флуоресценции белка от длины волны возбуждения должна приниматься в расчет при оценке вклада тирозиновых остатков в суммарную флуоресценцию белка и в принципе может быть использована при разработке подхода для разложения многокомпонентного спектра флуоресценции белков на составляющие — спектры флуоресценции отдельных триптофановых остатков. Использование параметрического представления флуоресцентных данных показало, что разворачивание как GlnBP, так и GlnBP/Gln является трехстадийным процессом (N — I1 — I2 — U), хотя в случае комплекса GlnBP/Gln эти три стадии существенно перекрываются. Процесс N -> 11 происходит при больших концентрациях GdnHCl для комплекса GlnBP/Gln по сравнению с GlnBP. Несмотря на сложный характер процесса разворачивания GlnBP, оно полностью обратимо.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2005
Объем: 18с.
Дополнительная информация: 2005.-N 11.-С.988-1005
Просмотров: 31