СРАВНЕНИЕ ГЕНО- И ЦИТОТОКСИЧЕСКОГО ЭФФЕКТОВ МЕТИЛНИТРОЗОМОЧЕВИНЫ НА ЛИНИЯХ КЛЕТОК, ПРОФИЦИТНЫХ И ДЕФИЦИТНЫХ ПО КОРРЕКЦИОННОЙ РЕПАРАЦИИ ДНК (MMR)

Аннотация:

Дефицит корректирующей репарации ДНК (MMR, mismatch repair) характерен для опухолей, образующих спектр рака толстого кишечника. В результате дефицита MMR в опухолевых клетках развиваются мутаторный фенотип и устойчивость к цитотоксическому действию алкилирующих агентов. При химическом метилировании ДНК образуется О6-метилгуанин (06-mG) — модифицированное основание, ответственное на гено- и цитотоксический эффекты алкилирующих агентов. В основе механизма цитотоксического действия 06-mG лежат вторичные разрывы ДНК, которые формируются в ходе функционирования механизма MMR. Авторы статьи предположили, что количество вторичных двухнитевых разрывов ДНК (ДР) в ответ на действие монофункционального метилирующего агента может отражать эффективность функционирования системы MMR в клетке (Тронов и др., 2005). В настоящей работе исследовали формирование вторичных ДР после действия метилирующего агента метилнитрозомочевины (МНМ) на опухолевые клетки, различающиеся по состоянию системы MMR: HeLa (MMR-профицитные клетки карциномы эндометрия), НСТ116 (MMR-дефицитные колоректальные опухолевые клетки) и Со1о320 (клетки опухоли сигмовидной кишки человека с неохарактеризованной системой MMR). Количество ДР определяли с помощью метода ДНК-комет в нейтральных условиях. Цитотоксический эффект оценивали по жизнеспособности (МТТ-тест) и по апоптотическому индексу (частоте морфологически различимых апоптотических клеток в терминальной фазе). Показано, что цитотоксический эффект МНМ на клетках HeLa проявлялся на 3-й сут после действия агента. Раньше этого срока (через 48 ч) в клетках обнаруживали ДР. MMR-дефицитные клетки НСТ116 были устойчивы к МНМ: в них не возникали ДР и отсутствовал апоптоз в течение 72 ч после действия МНМ. Обе линии клеток проявляли высокую чувствительность к генотоксическому действию этопозида, классическому индуктору нерепарируемых ДР в ДНК. Этопозид индуцировал в клетках ДР (через 6—12 ч) и последующий апоптоз (24 ч). По уровню МНМ-индуцированной гено- и цитотоксичности клетки Со1о320 занимают промежуточное положение между MMR-профицитными клетками HeLa и MMR-дефицитными НСТ116. Вместе с тем по частоте апоптоза клетки Со1о320 остаются устойчивыми к возникшим ДР. Таким образом, на трех линиях опухолевых клеток наблюдали прямую корреляцию между количеством вторичных ДР, возникших в пострепликативный период, и эффективностью системы MMR.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2006
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2006.-N 1.-С.19-27
Просмотров: 55