СТАБИЛЬНАЯ ТРАНСФЕКЦИЯ КЛЕТОК DAOY АНТИСМЫСЛОВЫМ ВЕКТОРОМ ПРОТИВ GM3 СИНТАЗЫ И ВРЕМЕННОЕ УМЕНЬШЕНИЕ УРОВНЯ ГАНГЛИОЗИДОВ

Аннотация:

Клеточные ганглиозиды участвуют во взаимодействиях между раковой опухолью и иммунной системой пациента. Для исследования их роли в формировании опухоли и ангиогенезе, мы разработали модель, основанную на антисмысловом ингибировании GМЗ-синтазы, одного из базовых ферментов в биосинтезе ганглиозидов. Получен ряд трансфицированных клонов клеточной линии DAOY (медуллобластомы человека), из которых выделены несколько клонов, которые стабильно экспрессировали 560-нуклеотидный фрагмент кДНК СМЗ-синтазы в смысловой или антисмысловой ориентации, а также клонов, трасфицированных пустым вектором. Все клеточные клоны перманентно интегрировали экспрессионные вектора в свою геномную ДНК. Полученные клоны были проанализированы на содержание ганглиозидов при помощи экстракции клеточных липидов, выделения ганглиозидов и применения высоко эффективной тонкослойной хроматографии. У одного из антисмысловых клонов, названного 7.2А, уровень ганглиозидов был снижен на 70%. Во всех контрольных клонах (трансфицированных смысловым и "пустым" векторами) содержание ганглиозидов не отличалось от нетрансфицированных клеток DAOY. Тем не менее, после 10-ти пассажей в культуре, уровень ганглиозидов у клона 7.2А возвращался к норме, несмотря на неизменно высокий уровень экспрессии антисмысловой мРНК. Следовательно, трансфекция клеток антисмысловой РНК может иногда вызывать только временное ингибирование экспрессии продукта-мишени.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2006
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2006.-N 3.-С.245-257. Библ. 25 назв.
Просмотров: 35