ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ИММУНО- БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РИБОСОМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ CLOSTRIDIUM PERFRINGENS ТИПА А

Аннотация:

Из дезинтегрированных клеток Clostridium perfringens типа А штамм ВР6К с помощью ультрацентрифугирования или фракционирования полиэтиленгликолем выделяли рибосомы (PC), достаточно очищенные по физико-фихимическим критериям: соотношение РНК/белок составляло 1,6- 1,7. Получали очищенные конъюгаты рибосомыанатоксин C.perfringens (PC-АН), сорбированные на геле гидроокиси алюминия. Рибосомальные препараты обладали низкой токсичностью и высокой протективной активностью: в дозе 6 ЕС защищали морских свинок и мышей от заражения 8 - 9 LD^g культуры C.perfringens. ВВЕДЕНИЕ В связи с низкой иммуногенностью основного компонента ассоциированных препаратов для профилактики клостридиозов - анатоксина C.perfringens - остается актуальной проблема создания эффективной защиты от газовой гангрены. Перспективным в этом отношении представляется использование рибосомальных препаратов ввиду их высокой иммуногенности и низкой токсичности [6, 15]. В последние годы интенсивно развивается новое направление в вакцинологии изучение конъюгированных вакцин. Повышение протективных свойств таких препаратов достигается за счет конъюгации их основного компонента с различными иммуностимуляторами [3, 13]. Рибосомы, обладающие свойствами природных иммуностимуляторов, можно рассматривать как потенциальные компоненты конъюгированных вакцин. Цель настоящего исследования заключалась в получении рибосом C.perfringens типа А, конъюгатов рибосомы-анатоксин и изучении их физико-химических свойств, токсичности и протективной активности в опытах на животных. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Клетки C.perfringens типа А штамм ВР6К выращивали на казеиново-панкреатической среде в логарифмической фазе роста [9]. Рибосомы из микробных клеток выделяли с помощью баллистической дезинтеграции и дифференциального центрифугирования [6, 15], а также фракционирования полиэтиленгликолем (ПЭГ) в концентрации 10 и 5% [4, 5]. Очищенный сорбированный анатоксин C.perfringens готовили согласно регламента производства № 87-87. Ковалентное связывание рибосом с анатоксином проводили с помощью 1 -этил-З-диметил-аминопропилкарбодиимида (ЭДК) по методу [11]. Полученные коньюгаты центрифугировали при 20 000 об/мин 30 мин, освобождали от непрореагировавших компонентов гельфильтрацией на колонке с сефарозой CL-2B и сорбировали на геле гидроокиси алюминия. Спектры поглощения в ультрафиолете в диапазоне 200 - 300 им определяли на спектрофотометре СФ-46. Содержание белкового азота определяли в реакции с реактивом Несслера, белка - по методу Лоури, Сахаров - антроновым методом [10], РНК - с орциновым реактивом [8]. Определение активности токсина - летальной (Dlm/мл) и антигенной (1+/мл); антитоксинсвязывающей способности анатоксинов (ЕС/мл) осуществляли общепринятыми методами [9]. Токсичность препаратов проверяли согласно [10].

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.46-49
Просмотров: 100