ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЦИТОХРОМОВ Р450 МИКРОСОМ КЛЕТОК ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА С ПОМОЩЬЮ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ

Аннотация:

Для выявления и идентификации форм цитохрома Р450 высокоочищенных мембран микросом печени человека были использованы методы протеомного анализа, которые включали разделение белков с помощью одномерного и двумерного электрофореза (ID и 2D) и молекулярное сканирование методом масс-спектрометрии участка геля в диапазоне 45-66 кДа (область, соответствующая молекулярной массе цитохромов Р450). Анализ содержания белков проводили по оригинальной технологии 1D-Z00MER, которая позволяла осуществлять обработку массива масс-спектров, а не единичных масс-спектров, как принято в стандартных методиках. В области 45-66 кДа было идентифицировано 13 микросомальных мембранных белков, в том числе такие формы цитохрома Р450, как 1А2, 1В1, 2А6, 2Е1, 2С8, 2С9, 2С10, 2D6, ЗА4, 4А11, 4F2. Исследование ферментной активности цитохромов Р450 семейств 1А, 2В, 2С, ЗА и 2Е в микросомах клеток печени человека выявило снижение скоростей 0-деалкилирования и N-деметилирования цитохромов Р450 1А1/1А2 и ЗА4 при патологии, в то время как активности 7-бензоксирезоруфин-О-дебензилазы (характеризует суммарную активность CYP2B и CYP2C), цитохрома Р450 2Е1 (окисление метанола), 7-пентоксирезоруфин-О-деалкилазы (CYP 2В), 7-этокси- и 7-метоксикумарин-О-деалкилаз (CYP 2В1) практически не изменялись. На основании полученных результатов показана эффективность использования комбинации протеомного и биохимического анализов для инвентаризации цитохромов Р450 и выявления уровня их экспрессии, обсуждаются возможности масс-спектрометрии для количественной оценки белков.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2007
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2007.-N 4.-С.400-410. Библ. 32 назв.
Просмотров: 60