СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ПРОДУЦЕНТОВ КОЛИБАКТЕРИНА ММА им. И.М.Сеченова, Москва

Аннотация:

Исследовали 3 штамма Escherichia coli, применяемые в производстве препарата колибактерина, выпускаемого биотехнологическими предприятиями РФ (штамм М17) и Германии (штаммы Mutaflor <Мес> и Simbioflor - соответственно). С целью оценки возможных перспектив совершенствования названных эубиотических препаратов были исследованы антигенные особенности указанных штаммов, их плазмидные профили, колициногенность и адгезивная активность, обусловленная наличием пилей 1 типа. Для антигенного маркирования культур были приготовлены иммунные сыворотки к производственному штамму E.coli М17, а также к продуцентам <Мес> и . Иммунизацию кроликов (весом 2 кг) проводили живой культурой в возрастающих концентрациях микробных клеток с интервалом 7 сут в течение 42 дней. Через 14 дней после последнего введения живой культуры определяли титр антител в реакции бактериальной агглютинации (РА) с живой и прогретой до ЮО^С культурой. Результаты титрования сывороток с гомологичными и гетерологичными штаммами показали, что титр сывороток в РА по гомологичному варианту превышал 1:10240 с живой культурой и 1:1600 с прогретой. Перекрестные реакции с гетерологичными штаммами во всех случаях не превышали титр 1:50 с живой культурой и 1:40 с прогретой, что позволяет считать сыворотки в титре 1:200 и выше штаммоспецифичными. Для выявления пилей 1 типа исследуемых штаммов было проведено так называемое <исследование роста>, предусматривающее определение абсолютного числа бактерий, связанныхс иммобилизованными маннаном (МН), РНКазой В (РН), фибронектином (ФН) и бычьим сывороточным альбумином (БСА) по кривой роста разведений исходной культуры; бактериальная агглютинация 1% пекарских дрожжей и 1% эритроцитов морской свинки. Результаты исследования показали, что штаммы М17 и <Мес> имеют сходный высокоадгезивный (М") фенотип (высокое связывание с МН и РН и отсутствие связывания с ФН и БСА), однако штамм <Мес> в обычных условиях культивирования имеет низкий процент пилированности, в отличие от штамма М 17; тогда как штамм имеет низкоадгезивный (М^) фенотип (высокое связывание с РН, низкое связывание с МН на фоне отсутствия связывания с ФН и БСА). Адгезия, оцененная во всех использованных тестах, была на 90 - 95% маннозочувствительна, что подтверждает принадлежность адгезина к пилям 1 типа. Для определения плазмидного профиля вышеуказанных штаммов проводили выделение внехромосомной ДНК на мини-колонках Qiagen (Германия, США) с последующим разделением в 0,7% агарозном геле при 92 мВ. В штамме М17 не было обнаружено наличие плазмидной ДНК. Плазмидные профили штаммов <Мес> и четко отличались друг от друга количеством полос ДНК и длиной их пробега в геле. Для штамма <Мес> с помощью рестрикционного анализа определено наличие 2 плазмид размером -5,3 кб и ~3 кб. Колициногенность исследована с использованием индикаторного штамма G коллекции Фредерика. Установлено, что штаммы <Мес> и обладают колициногенной активностью, в отличие от производственного штамма М17, которой таковой не обнаруживал. Считается, что штаммы М17 и <Мес> ведут общее происхождение от штамма E.coli, выделенного немецким физиологом А.Ниссле. Однако из полученных данных следует, что указанные штаммы различаются по ряду признаков: антигенной структуре, регуляции экспрессии пилей 1 типа, колициногенной активности и плазмидным профилям. Вероятно, в процессе длительного использования в производстве штамм М17 изменил ряд своих свойств. В частности, ранее исследовавшие этот штамм авторы указывали на проявление им антагонистической активности против других микроорганизмов за счет продукции им колицина В. Однако это не было подтверждено настоящим исследованием, так же как и не было обнаружено наличие в этом штамме внехромосомной ДНК, которая могла бы быть носителем колицинового оперона.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 1998
Объем: 2с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.78-79
Просмотров: 122