Лентивирусная трансдукция малодифференцированных костно-мозговых клеток-предшественников in vivo

Аннотация:

Цель исследования: Создание эффективного способа переноса генов в недифференцированные клетки костного мозга методом летпивирусной трансдукции in vivo. Материалы и методы: Выделенные с помощью метода магнитной сепарации клетки костного мозга мыши с фенотипом Lin-c-kit+ трансдуцировали с помощью лентивирусного вектора, содержащего маркерный ген, кодирующий зеленый флюоресцентный белок (сорСFР). Долю клеток, экспрессирующих трансген, оценивали на поточном цитофлюорометре. Трансдуцированные in vitro донорские клетки самца вводили летально облученным самкам-реципиентам для получения селезеночных колоний. Интеграцию генетической конструкции в костно-мозговые клетки-предшественники in vivo контролировали по наличию в геномной ДНК клеток селезеночных колоний векторной последовательности WPRE (woodchuck post-transcriptional regulatoiy element). Стабильность интеграции генетической конструкции в геном клеток-мишеней оценивали на культуре фибробластов линии МНЗТЗ, которые культивировали в течение 3 мес после трансдукции. Результаты: Предложенная генетическая конструкция позволила добиться высокой эффективности nрансдукции малодифференцированных клеток костного мозга и обеспечила высокий (2 7%) уровень экспрессии трансгена in vitro. В экспериментах по получению селезеночных колоний у летально облученных животных было показано, что часть селезеночных колоний содержала трансген, и, следовательно, используемая генетическая конструкция была интегрирована в геном клеток-потомков донорских клеток. Среди донорских костно-мозговых клеток-предшественников, содержащих -трансген, присутствовали колониеобразующие единицы, которые способны формировать селезеночные колонии, в том числе недифференцированного типа, у летально облученных животных.

Авторы:

Издание: Кардиологический вестник
Год издания: 2007
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2007.-N 2.-С.37-42. Библ. 9 назв.
Просмотров: 27