Действие антимикробных пептидов из нейтрофильных гранулоцитов на опухолевые и нормальные клетки в культуре

Аннотация:

Изучали действие эффекторных молекул системы врожденного иммунитета — катионных антимикробных пептидов (АМП) из нейтрофильных гранулоцитов (протегрина 1 свиньи и бактенецина 5 козы) — на опухолевые и нормальные клетки млекопитающих in vitro. Сравнивали цитотоксичскую активность различных по структуре протегрина 1 (ПГ1) и бактенецина 5 (Бак5) в отношении ряда клеточных линий, а также особенности их действия на эти клетки. Изучали, в частности, способность пептидов проникать через клеточную мембрану в цитоплазму клеток-мишеней. Показано, что ПГ1, имеющий структуру бета-шпильки, обладает быстрым и выраженным цитотоксическим действием в отношении большинства исследованных клеточных линий, причем это действие проявляется более заметно в бессывороточной среде и снижается в среде, содержащей 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, но не отменяется полностью. Рассмотрено влияние серпинов (а 1-антитрипсина) на цитотоксичсскую активность ПГ1. Установлено, что в присутствии al-антитрипсина цитотоксическая активность ПГ1 снижается, в свою очередь антипротеазная активность al-антитрипсина угнетается в присутствии ПГ1. Показано, что Бак5 (линейный пептид), имеющий высокое содержание пролина в составе молекулы, проявляет значительно более низкую, чем в ПГ1, токсическую активность в отношении исследованных клеточных линий. Получены ПГ1 и Бак5, конъюгированные с флуоресцентным красителем (BODIPY F1), с помощью конфокальной микроскопии показано, что оба меченых пептида способны проникать через мембраны в цитоплазму клеток в течение 15—30 мин после добавления пептидов к клеточным суспензиям. С помощью проточной цитометрии показано, что проникновение пептидов в клетки-мишени зависит от температуры инкубационной среды и уровня энергетического метаболизма клеток. При блокировании синтеза АТФ или понижении температуры (до 4 °С) процесс транслокации обоих пептидов через клеточные мембраны угнетается. Присутствие веществ, угнетающих эндоцитоз (винбластина, цитохалазина В и метилциклодекстрина), тоже снижает эффективность включения ПГ1-BODIPY и EaK5-B0DlPY в клетки, но не отменяет полностью этот процесс. Полученные данные дают возможность предположить, что оба пептида проникают в клетки как при участии процесса эндоцитоза, так и независимо от него. Способность пептидов проникать во внутриклеточное пространство свидетельствует в пользу предположения о том, что АМП могут участвовать в процессах, происходящих в цитоплазме эукариотических клеток — как опухолевых, так и нормальных, в том числе в модуляции активности внутриклеточных серпинов.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2007
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2007.-N 12.-С.1000-1010. Библ. 40 назв.
Просмотров: 71