МЕТАЛЛО-ХЕЛАТ-АФФИННЫЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ КАК НОВЫЙ ИНСТРУМЕНТ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ СТРУКТУРЫ БЕЛКОВ

Аннотация:

Металло-хелат-аффинный гель электрофорез (МХАГЭ) объединяет в себе концепции аффинного электрофореза и металло-хелат-аффинной хроматографии; он получил распространение в последние годы при изучении взаимодействия белков с хелатированными ионами металлов. Метод позволяет определить топографию металлсвязывающих сайтов в пептидах и на поверхности белковой глобулы, а также константы диссоциации комплекса (хелатированный металл) белок. МХАГЭ был применен при изучении локализации остатков гистидина в молекулах рибонуклеаз Bacillus amyloliquefaciens (барназа), В. intermedius (биназа) и их мутантов, а также при изучении их взаимодействия с белковым ингибитором В. amyloliquefaciens (барстаром). Константы диссоциации биназы и барназы в системе полиакриламид/метокси-ПЭГ-ИДК-Cu(ll) составляют 8.31 и 2.90 мМ соответственно. Мутант биназы, полученный фотоокислением гистидина 101 (HIOID), не имел никакого сродства по отношению к ИДК-Си(Н). Такими же свойствами обладал и мутант биназы Н101Е, полученный методом сайт-направленного мутагенеза; это доказывает, что именно остаток гистидина участвует во взаимодействии с хелатированным ионом меди. Показано также, что белковый ингибитор барстар при МХАГЭ не имеет сродства к хелатированному иону меди. Это объясняется тем, что гистидин 17 локализован внутри белковой глобулы и не доступен для взаимодействия с ионами меди. МХАГЭ может быть применен при изучении белок-белковых взаимодействий, в частности, - взаимодействия биназа-барстар. При использовании электрофореза этого комплекса с использованием хелатированного иона Cu(ll) аффинность отсутствовала. Сделано заключение, что гистидин 101в биназе участвует в образовании комплекса с барстаром и локализован внутри этого комплекса.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 2с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.360-361
Просмотров: 84