МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ ГЕНА rpb7+ Schizosaccharomyces pombe, КОДИРУЮЩЕГО НЕЗАМЕНИМУЮ СУБЪЕДИНИЦУ ЯДЕРНОЙ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ 11

Аннотация:

Транскрипция генов, кодирующих белки, осуществляется в эукариотической клетке ядерной РНК-полимеразой II. Наиболее полно охарактеризованы РНК-полимеразы II Saccharomyces cerevisiae и Homo sapiens: клонированы гены обоих организмов, кодирующие все 12 субъединиц этого важнейшего фермента. В настоящей работе клонированы кДНК и ген субъединицы Rpb7, входящей в состав ядерной РНК-полимеразы II Sz. pombe, другого удобного объекта молекулярно-генетических исследований, эволюционно далекого как от Н. sapiens, так и от S. cerevisiae. Клонированная кДНК кодирует полипептид и 172 а. о. с молекулярной массой 19.1 кДа и изоэлектрической точкой р15.4; в дистальной части гена rpb7* Sz. pombe содержится один интрон длиной 67 п. н. Только часть клонированного нами гена rpb7*, кодирующая первые 140 а. о., совпадает с фрагментом космиды с2Е11 (Z98850 в EMBL), секвенированной в Sanger Centre (Великобритания) в рамках крупномасштабного анализа первичной структуры генома Sz. pombe. Остальная часть гена в этой космиде отсутствует, что указывает на делецию части хромосомы 1 Sz. pombe в составе с2Е11. Действительно, космида с2Е11 соответствует одному из трех мест хромосомы 1, где не было получено перекрывания соседних контиг (Cell, 1993, 73, 109120), что связано, по-видимому, с наличием до сих пор не охарактеризованного ДНК-повтора в этой области генома. Таким образом, картирование и секвенирование области, прилегающей к 3 '-концу гена rpb7*, поможет прояснить структуру этого пока неясного участка хромосомы 1 Sz. pombe. Поскольку в составе РНК-полимеразы II S. cerevisiae субъединица RPB7 образует довольно прочный субкомплекс с субъединицей RPB4, мы будем использовать кДНК rpb7* Sz. pombe для конструирования "приманки" в методе двойных гибридов в надежде найти таким образом до сих пор неидентифицированную у делящихся дрожжей Sz. pombe субъединицу Rpb4.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 1с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.363-363
Просмотров: 29