ПОЛУЧЕНИЕ ОДНОЦЕПОЧЕЧНЫХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ПОВЕРХНОСТНОГО ГЛИКОПРОТЕИНА Е ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА

Аннотация:

Вирус клещевого энцефалита (КЭ) поражает нервную систему. Единственным специфическим средством лечения является донорский противоэнцефалитный глобулин. Очевидна необходимость поиска альтернативных терапевтических средств. Одним из них могут оказаться рекомбинантные одноцепочечные антитела, которые состоят из вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей иммуноглобулинов, объединенных гибким пептидным линкером. Одноцепочечные антитела могут нейтрализовать вирусные агенты, что позволяет рассчитывать на их использование для борьбы с вирусными заболеваниями в будущем. Для создания рекомбинантных антител против вируса КЭ в качестве прототипа были использованы МКА Е6В, взаимодействующие с доменом Е2 поверхностного гликопротеина Е вируса КЭ. Эти антитела обладают вируснейтрализующей активностью; к ним получены антиидиотипические антитела (АИА), распознающие идиотип Е6В. Клонированы и секвенированы гены, кодирующе вариабельные домены тяжелой и легкой цепей МКА Е6В. На основе этих генов была получена единая последовательность с промежуточным олигонуклеотидным коннектором, кодирующим пептидный линкер (Gly^Ser)^. К 5'-концу этой последовательности был присоединен фрагмент ДНК, кодирующий лидерный пептид пектатлиазы В Erwinia carotovora. Для эффективной транскрипции этот ген был встроен под контроль позднего промотора фага Т7 в плазмиду pGEMI, которой трансформировали клетки Е. соli BL21(DE3), содержащие ген РНК-полимеразы фага Т7 под индуцибельным промотором /acUV5. Трансформированные клетки после индукции ИПТГ продуцировали одноцепочечные антитела в процессированной и непроцессированной формах с мол. массами около 26 и 28 кДа, соответствующими расчетным. Они взаимодействовали с антиидиотипическими антителами против МКА Е6В. При анализе субклеточной локализации белков показано, что обе формы рекомбинантных антител находятся в растворимом состоянии. Одноцепочечные антитела в составе грубых клеточных лизатов хорошо связывались с АИА против идиотипа Е6В. Кроме того, рекомбинантный белок Е вируса КЭ, который взаимодействовал с исходными МКА Е6В, распознавался полученными одноцепочечными антителами. Мы полагаем, что полученные нами одноцепочечные антитела сохраняют конформацию вариабельного домена исходных МКА и способны взаимодействовать с белком Е вируса клещевого энцефалита.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 1с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.374-374
Просмотров: 176