ИЗУЧЕНИЕ "СИМБИОТИЧЕСКИХ" ФУНКЦИЙ ГЕНОВ "ТЕПЛОВОГО ШОКА" ОПЕРОНА groESL У КЛУБЕНЬКОВЫХ БАКТЕРИЙ

Аннотация:

С использованием полимеразной цепной реакции и праймеров для высококонсервативного внутреннего района groEL-rena Rhizobium eth, штамм CFN426, был амплифицирован фрагмент ДНК в 290 п.н. Фрагмент использован в качестве зонда в экспериментах по Саузерн-гибридизации между меченым фрагментом и гидролизованной рестриктазами тотальной ДНК, выделенной из 35 штаммов Rhizobium. Только один штамм R. tropici - С1АТ899 - имел единственную копию данного гена. Остальные штаммы содержали от 2 до 6 фрагментов, гибридизующихся с амплифицированным фрагментом groEL-гена. Фрагмент ^roESL-оперона штамма СЕЗ клубеньковых бактерий фасоли (7?. leguminosarum bv. phaseoli) был клонирован в плазмиде-векторе р220. Мутагенез клонированного фрагмента проведен in vivo в клетках штамма S17-1 Е. соИ с помощью транспозона MiniMu-/ac (имеет устойчивость к хлорамфениколу). Для конструирования мутантных штаммов Rhizobium методом замещения последовательности "дикого типа" мутантной аллелью ^roESL::MiniMu-/ac использованы штаммы Rhizobium с наименьшим числом повторов оперона (по две копии у бактерий R. galegae, R. leguminosarum bv. trifolli, R. loti). Трансконъюгаты были получены в двух вариантах скрещивания: со штаммом С1АМ0703 str 'R. galegae (15 клонов) и штаммом NZP2213 str" R. loti (II клонов). Частота возникновения трансконъюгатов составляла 10 ^-10 ^ Все полученные трансконъюгаты не обладали (З-галактозидазной активностью при непермиссивных температурах, что говорит об отсутствии экспрессии мутантного groESL-оперона. Однако их температурочувствительность не была изменена по сравнению с родительскими ризобиальными штаммами. Для изучения предполагаемой роли groEL-генов в формировании и функционировании симбиоза проведен анализ симбиотических свойств штаммов, несущих аллель groESL::MiniMu-/ac в условиях стерильного микровегетационного опыта. Среди исследованных 26 трансконъюгатов обнаружены три, полученные в скрещивании со штаммом NZP2213 st^ R. loti, образующие на растениях лядвенца (Lotus fenuis) неактивные клубеньки аномального строения. Таким образом, показана возможность участия генов "теплового шока" в становлении симбиотических взаимоотношений у клубеньковых бактерий.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 1с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.380-380
Просмотров: 27