ПРИМЕНЕНИЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ АКТИВНОСТИ ФАКТОРА ТРАНСКРИПЦИИ NF-кВ

Аннотация:

В обзоре рассмотрены основные подходы к использованию олигонуклеотидов для ингибирования активности фактора транскрипции NF-кВ: 1) применение антисмысловых олигонуклеотидов, комплементарных мРНК NF-кВ и способных подавлять синтез NF-кВ в клетке; 2) использование модифицированных олигонуклеотидов, способных образовывать триплекс с участком узнавания NF-кВ в ДНК и предотвращать активацию NF-кВ-зависимой транскрипции; 3) использование ДНК-дуплексов, содержащих участки узнавания NF-кВ, для конкурентного ингибирования NF-кВ и выведения его из участия в клеточных процессах. Обобщены работы по конструированию новых типов ингибиторов NF-кВ на основе модифицированных ДНК-дуплексов, приведены основные направления их синтеза, предложена оптимальная структура ингибитора NF-кВ. Фактор транскрипции млекопитающих NF-кВ впервые был охарактеризован Сеном и Балтимором [1] как активирующий транскрипцию белковый комплекс В-клеток, специфически связывающийся с определенной нуклеотидной последовательностью в энхансере генов легких цепей иммуноглобулинов. В настоящее время под фактором NF-кВ обычно подразумевают гетеродимер, состоящий из субъединиц р50 и р65 (50 и 65 кДа соответственно) [2,3]. Гены этих субъединиц содержат участки гомологии с клеточным онкогеном c-rel, его вирусным аналогом v-rel и морфогенами дрозофилы dorsal и dif. Поэтому термин NF-кВ часто применяют и для обозначения целого семейства факторов транскрипции, которые имеют область высокой гомологии - RHR (Rel Homology Region) - с продуктом онкогена rel. В 1993 г. Набелем и Вермой была предложена номенклатура белков NF-кВ/rel [4]. RHR находится на N-концах этих белков и отвечает за димеризацию, связывание с ДНК и транспорт активных белков из цитоплазмы в ядро. Члены семейства NF-кВ/rel: NP-KBI (р50/р 105), NF-KB2 (р52/р 100), Rel, RelA (p65), RelB, белки дрозофилы dorsal и dif существуют как гомо- и гетеродимеры и связываются с определенными участками в энхансерных областях большого числа генов, значительная часть которых вовлечена в процессы клеточной защиты и дифференциации [3,5]. Фрагмент ДНК - так называемый кВ участок, - который узнают белки семейства NF-кВ/rel, состоит из 10 п.н. : 5'-GGGPuNNPyPyCC-3' (где Ри - А или G, Ру-Т или С, N-A, G, Т или С) [6]. Следует отметить, что белки NF-кВ/rel могут связывать и другие последовательности, отличные от кВ-участка [7]. В 1995 г. опубликованы две работы по ренгтеноструктурному анализу комплекса между димером субъединицы р50 NF-кВ и олигонуклеотидными дуплексами, содержащими кВ-участок [8, 9]. Установлено, что димер р50 узнает ДНК благодаря пептидным петлям, которые охватывают около 2/3 двойной спирали кВ-участка, оставляя свободной только малую бороздку ДНК. В результате такого взаимодействия осуществляется примерно 38 индивидуальных контактов белка с ДНК. При этом каждая из субъединиц димера р50 взаимодействует преимущественно с одним из тяжей ДНК. Характер связывания белков семейства NF-кВ с ДНК отличается от известных типов узнавания ДНК другими факторами транскрипции и большинством ДНК-связывающих белков.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.389-400
Просмотров: 59