ХАРАКТЕРИСТИКА ДНК, АВТОНОМНО РЕПЛИЦИРУЮЩЕЙСЯ У ТРАНСГЕННЫХ НАСЕКОМЫХ И МЫШЕЙ

Аннотация:

С помощью трансгеноза на мышах исследовали поведение в клетках млекопитающих челночной плазмиды рг8а, образовавшейся и автономно реплицирующейся в клетках трансгенного тутового шелкопряда Bombyx mori. Стабильный перенос этой плазмиды в клетки мышей происходил только при микроинъекциях экзогенной ДНК в пронуклеус, но не в цитоплазму зиготы. У трансгенных животных нуклеотидные последовательности, гомологичные последовательности плазмиды рг8а, существовали преимущественно во внехромосомной форме. Как и в клетках тутового шелкопряда, структура трансгена у мышей изменялась в процессе его переноса и при передаче по наследству. Последовательно возникающие делеции в экзогенной ДНК имели сходный характер у разных особей, что указывает на существование механизмов рекомбинации, участвующих в "адаптации" трансгена к хозяйской системе репликации. Частичное секвенирование нуклеотидной последовательности, сохраняющейся после многочисленных делеции во внехромосомно реплицирующихся производных плазмидах, показало, что она содержит протяженные области гомологии с отдельными повторяющимися элементами генома человека. Сравнение этой последовательности с известными ранее элементами вирусных и клеточных ДНК, обеспечивающими начало репликации (on), указывает на существенное сходство с некоторыми из них. Область гомологии с ол-элементами перекрывается с участком рг8а, сходным с ретротранспозоном LI человека. При трансгенозе одним из возможных результатов переноса экзогенной ДНК в клетки реципиента является ее персистирование во внехромосомной форме [1,2]. Однако на практике без применения специальных подходов этот вариант реализуется очень редко, значительно чаще происходит встраивание трансгена в геном клеток. Внехромосомно локализованные трансгены обычно получают с использованием плазмид, которые содержат функциональные элементы ДНК-содержащнх вирусов, обеспечивающие автономную репликацию трансгена в реципиентных клетках [3-9]. Подобные челночные векторы используют для изучения молекулярных механизмов инициации репликации внехромосомных ДНК [3, 9], изучсияя мутационных процессов в клетке [4, 8], выяснения взаимосвязи между интегрированной и внехромосомной формами вирусных геномов [5, 7). Большое значение имеет использование автономно реплицирующихся плазмид и для решения задач, связанных с генной терапией [10]. Ранее нам в результате работ по трансгенозу на тутовом шелкопряде удалось получить челиечную автономно реплицирующуюся плазмиду рг8а, состоящую из фрагментов бактериальной плазмиды pBR322 и клеточной ДНК тутового шелкопряда [II, 12]. Эта плазмида образовалась in vivo в результате негомологичной рекомбинации в поколении F2 трансгенных насекомых и передавалась по наследству, по крайней мере, до поколения F4. Задача настоящей работы - детальное изучение первичной структуры, образовавшейся in vivo и реплицирующейся внехромосомно в клетках тутового шелкопряда плазмиды рг8а, а также ее поведения при переносе в клетки мыши.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.427-434
Просмотров: 201