ОПТИКО-БИОСЕНСОРНЫЙ АНАЛИЗ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ РЕДОКС-ПАРТНЕРОВ ЦИТОХРОМ Р450 2В4 - СОДЕРЖАЩЕЙ МОНООКСИГЕНАЗНОЙ СИСТЕМЫ В УСЛОВИЯХ ГИДРОКСИЛИРОВАНИЯ

Аннотация:

Взаимодействия между цитохром Р450 2В4 (d-2B4), NADPH-цитохром Р450 редуктазой (d-Fp) и цитохромом b5 (d-b5) в мономерной реконструированной Р450 2В4-содержащей монооксигеназной системе были исследованы с помощью оптического биосенсора в присутствии NADPH и 7-пентоксирезоруфина (т.е. в гидроксилирующих условиях). Для этого каждый из партнеров был иммобилизован по аминогруппам на карбоксиметилдекстрановую поверхность биочипа оптического биосенсора IAsys+. Такая иммобилизация белков не приводила к потере их активности в биочипе. Зарегистрировано формирование бинарных d-Fp/d-2B4 комплексов. Константы скоростей ассоциации/диссоциации реакции комплексообразования составляли (kOT/koff)=(0,013±0,005)-106'M-1c1/ 0,05±0,02 с-1, а константа диссоциации KD = (0,26±0,13)-10-6 М. Сравнение kon, koff и KD для d-Fp/d-2B4 комплексов, формирующихся в условиях гидроксилирования (О-деалкилирования), с соответствующими константами для окисленных форм белков - (0,10±0,03)-106-М-1-с-1 (0,14±0,06) с"1, (0,71±0,37)10-6 М - показывает снижение kon и в незначительной степени KD за счёт увеличения времени жизни комплексов при переходе от окисленного состояния к условиям гидроксилирования. Формирование комплексов между d-Fp и d-b5 не было зарегистрировано как в условиях гидроксилирования, так и для окисленных форм белков. В обоих случаях показано формирование тройных комплексов d-Fp/d-2B4/d-b5.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2008
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2008.-N 4.-С.435-444. Библ. 23 назв.
Просмотров: 21