Применение ДНК-полимеразы из Termus termophillis в полимеразной цепной реакции для диагностики ВИЧ-инфекции.

Аннотация:

Для диагностики генетических и инфекционных болезней, в том числе и ВИЧ-инфекции, в последние годы используется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющий обнаружить геном вируса иммунодефицита человека, встроенный в геном пораженных лимфоцитов, в период отсутствия в крови антител или при недостаточном их уровне при применении иммуноферментного анализа. (ИФА) и иммуноблотинга (ИБ). Обычно в ПЦР используют термостабильную ДНК-полимеразу из Termus aquaticus (Taq-полимераза). Сходными свойствами с Taq-полимеразой обладает ДНК-полимераза из Termus termophilus, которая применяется в диагностике генетических болезней (Шварц ЕМ., 1989). Исследовали образцы геномной ДНК лимфоцитов 173 доноров в возрасте от 19 до 23 лет, кровь которых предварительно подвергали ИФА на наличие антител к БИЧ в тест-системах "Антиген" (Новосибирск). При положительных результатах ИФА дополнительно ее исследовали в И Б (тест-системы "Dii Pont HTLV-III/ LAV Western Blot", США). Из выделенных на градиенте плотности фиколл / уротраст (1,077 г/л) лимфоцитов крови получали геномную ДНК методом фенольной экстракции с последующим осаждением охлажденным этанолом. Амплификацию проводили в 100 мкл смеси: 67 мМ трисНС1, рН 8,8; 16,6 мМ (NH),SO" 6,7 мМ MgCI,; 10 мМ 2-меркаптоэтанола; 6,7 мкМ ЭДТА: 170 мкг/мл бычьего сывороточного альбумина; четыре дезоксинуклеозидтрифосфата (по 1 мМ каждого); пару праймеров на GAG или ENV (каждый по 0,1-0,3 мкг) и 0,11,0 мкг геномной ДНК лимфоцитов перифе

Авторы:

Издание: Военно-медицинский журнал
Год издания: 1998
Объем: 1с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.65-65
Просмотров: 29