УСИЛЕНИЕ ЭПИДЕРМАЛЬНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ С ПОМОЩЬЮ РЕКОМБИНАНТНОГО ФАКТОРА РОСТА ВИРУСА ОСПОВАКЦИНЫ

Аннотация:

Обнаружение способности вирусов к экспрессии белков, обладающих структурной и функциональной гомологией с клеточными аналогами [46, 12], создало предпосылки для исследования данных белков in vitro и in vivo с целью создания препаратов для лечения и профилактики различных заболеваний человека. Основными преимуществами использования этих вирусных белков, которые были названы вирокинами, являются, с одной стороны, чисто технические удобства в получении их индивидуальных генов, так как в геноме вирусов они не прерываются интронными последовательностями, а с другой - тот факт, что вирокины, как правило, обладают большей специфической активностью, чем их клеточные аналоги [7,10, 11]. Одним из представителей вирокинов является фактор роста вируса осповакцины, имеющий 35% аминокислотную гомологию с человеческим эпидермальным фактором роста и обладающий способностью взаимодействовать со специфическими рецепторами на поверхности кератиноцитов и как следствие ускорять заживление ожоговых ран [4, 5, 10]. В своих ранних работах мы клонировали ген фактора роста вируса осповакцины, используя отечественный штамм вируса, определили нуклеотидную последовательность данного гена, создали рекомбинантный продуцент фактора роста и изучили его иммунохимические свойства [2, 3]. Целью данной работы явилась оценка качественной способности рекомбинантного фактора роста вируса осповакцины (ЭФРВ) взаимодействовать со специфическими рецепторами на поверхности клеток и влиять на процессы восстановления эпидермального слоя клеток при ожоге II степени у крыс. Материал и методы В экспериментах использовали химерный белок ЭФРВ, слитый с р-галактозидазой Е. coli, процесс создания которого описан в наших предыдущих работах [2, 3]. В качестве носителя использовали препарат "Левомеколь" производства Горьковского химфармзавода. Выбор данного препарата обусловлен тем, что это средство изготовлено на водорастворимой основе (полиэтиленоксид), что способствует эффективному взаимодействию ростового фактора с рецепторами. Определение взаимодействия рекомбинантного белка с мембранными рецепторами методом иммунной электронной микроскопии проводили по следующей методике. Клетки эпидермальной карциномы А-431 выращивали на покровных стеклах до появления 75% монослоя в соответствии с описанным ранее методом [7]. После достижения указанной выше плотности клеток осуществляли истощение клеток от эндогенных ростовых факторов путем их культивирования в бессывороточной среде в течение 48 ч с заменой бессывороточной среды через 24 ч. По окончании истощения удаляли среду и отмывали клетки охлажденным до 4°С изотоническим солевым буфером. ЭФРВ наносили на поверхность клеток в солевом изотоническом растворе рН 7,4 в концентрации 1 мкг/мл. Инкубацию осуществляли при 4°С в течение 1 ч. Фиксацию клеток, их обработку антителами, конъюгатом коллоидного золота с белком А, а также изучение взаимодейст-вия с мембранными рецепторами проводили по методу, изложенному в работе [9].

Авторы:

Издание: Вестник Российской Академии медицинских наук
Год издания: 1998
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.38-42. Библ. 12 назв.
Просмотров: 33