АНТИСМЫСЛОВАЯ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНАЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ К РЕГУЛЯТОРНОЙ СУБЪЕДИНИЦЕ сАМР-ЗАВИСИМОЙ ПРОТЕИНКИНАЗЫ 1 ТИПА: НОВАЯ СТРАТЕГИЯ В ТЕРАПИИ РАКА

Аннотация:

Применение общепринятых методов в химиотерапии рака обычно сопровождается системной токсичностью, выражающейся в том, что химиотерапевтическими агентами поражается большое количество клеточных мишеней. На основе специфичности комплементарных взаимодействий нуклеотидов Уотсона-Крика были разработаны новые терапевтические средства - антисмысловые олигонуклеотидные последовательности, которые были апробированы в лечении рака и других заболеваний человека [30]. сАМР-зависимая протеинкиназа А (ПКА) [14, 15] существует в виде 2 изомеров (тип 1 и II), которые различаются по своим регуляторным субъединицам (RI и RII), взаимодействующим с каталитическими субъединицами [1, 2, 20, 34]. Биохимическими исследованиями и клонированием генов было доказано существование 4 изоформ Rсубъединиц Rice, Rip, Rlla и Rllp [17, 41]. Установлено, что изменение соотношения двух изоформ ПКА (1 и II тип) коррелирует с клеточным ростом и дифференцировкой [4, 5, 7-9, 18, 19,29,33,36]. В большинстве исследованных первичных опухолей человека обнаружены увеличенная экспрессия RI и увеличенное по сравнению с таковым в нормальных тканях отношение ПКА 1/ПКА II [3, II, 12, 24, 25, 27, 32, 42]. Два основных класса регуляторных субъединиц ПКА, RI и RII имеют в своей первичной структуре общий консервативный карбоксильный конец и существенно различающийся N-конец молекулы [37]. На основе этих данных был синтезирован антисенс к М-концевой последовательности (17-й кодоны) человеческой Ria [38]. Было установлено, что Rla-антисенс (1-7-й кодоны) (15-30 мкМ) ингибирует рост клеток человеческих опухолевых линий эпителиального происхождения [44], лейкемических клеток HL-60 [39] без видимых признаков цитотоксичности. Обработка клеток Rloc-антисмысловым фосфоротиоатом приводила к значительному снижению уровня Ria и увеличению уровня Rllp в клетках по сравнению с аналогичными показателями в необработанных контрольных клетках [39, 44], в то время как Rllp антисмысловой фосфоротиоат (17-й кодон человеческой субъединицы Rllp) приводил к обратному эффекту, а именно к увеличению уровня Ria и уменьшению уровня Rllp [38, 44]. Немодифицированные олигодезоксинуклеотиды были менее эффективны, чем Rla-олигодезоксионуклеотиды, метилфосфонаты или фосфоротиоаты, смешанные олигонуклеотиды, такие как фосфоротиоат олигодезоксинуклеотид (PS-oligo), содержащий сегмент 2'-OMeRNA) или метилфосфонат (p-MeDNA) [21, 22, 31, 35]. Установлено, что гибридные олигонуклеотиды имеют более высокую активность, чем фосфоротиоаты-антисенсы [22,35]. Мы использовали такой гибридный олигонуклеотид, направленный против М-концевых 813-х кодонов человеческой Ria [6]. Наблюдалось ингибирование роста в культуре клеток карциномы кишечника, карциномы легких, лейкемии, Тлимфомы. Иммунопреципитация и анализ мРНК показали, что эффект Rla-антисенса связан с уменьшением экспрессии Ria. Эти результаты свидетельствуют, что сАМР-зависимая ПКА является уникальным ферментом для регуляции роста клеток и антисенс, снижающий синтез Rla-субъединицы, открывает широкие возможности для подавления роста большого числа разного типа раковых клеток. В настоящей статье мы представляем данные о том, что специфическое ингибирование экспрессии гена Ria антисмысловыми олигонуклеотидными последовательностями (Rla-антисенс) при

Авторы:

Издание: Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Год издания: 1998
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.15-20
Просмотров: 52