ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА ДИСТРОФИНА ЧЕЛОВЕКА В СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦАХ МЫШЕЙ mdx ПОСЛЕ БАЛЛИСТИЧЕСКОЙ ТРАНСФЕКЦИИ

Аннотация:

Методом баллистической трансфекции (БТ) с использованием "генного ружья" осуществлена доставка генетических конструкций pMLVDy или pHSADy, несущих полноразмерную кДНК гена дистрофина в четырехглавую или ягодичную мышцы бедра мышей mdx - естественных биологических моделей тяжелой наследственной болезни миодистрофии Дюшенна. Иммуноцитохимическим методом установлено наличие кластеров дистрофин-положительных мышечных волокон (ДПМВ) в местах БТ. Число ДПМВ составляет в среднем 2.0% на 17-й день и возрастает до 3% к 60-му после БТ конструкцией pMLVDy по сравнению с 0.2% "ревертантных" ДПМВ в контроле (без БТ). Число ДПМВ составляет 3% на 20-й день после БТ конструкцией pHSADy. В этой серии отмечено появление ДПМВ, содержащих дистрофии, гомогенно распределенный в миоплазме (3%), либо дающих сравнительно слабое положительное свечение отдельных участков под сарколеммой (10%). Отмечено повышение числа ревертантных ДПМВ в опытной и контрлатеральной лапах mdx после БТ без гена Dy либо при БТ с использованием маркерного гена lacZ (0.6 и 2.8% соответственно). В обеих сериях опытов отмечено достоверное увеличение числа ДПМВ в одноименных мышцах контрлатеральной лапы -2.8% через 60 дней после введения pMLVDy и 6.7% через 20 дней после введения БТ pHSADy. Методом ПЦР показано присутствие кДНК гена человека во всех скелетных мышцах через 3 нед после БТ, а также в сердце, кишечнике, языке и мозге. Методом иммуноблоттинга доказан синтез нормального (427 кДа) дистрофина человека в мышцах mdx мышей после БТ. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности метода БТ для доставки в мышцы векторных конструкций, экспрессирующих ген дистрофина.

Авторы:

Издание: Генетика
Год издания: 1998
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 1998.-N 6.-С.730-736
Просмотров: 31