СУБКЛОНИРОВАНИЕ И БИОХИМИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ГЕНА ribR У Bacillus subtilis

Аннотация:

ПЦР-копия гена rihR Bacillus suhtilis была субклонирована в клетках Escherichia coli под контролем индуцибельного промотора фага Т7. Продукт гена rihR - полипептид с молекулярной массой 26 кДа, что соответствует размерам гена в 690 пн. Белок, кодируемый геном ribR, представляет собой флавокиназу, субстратом для которой является восстановленная форма рибофлавина. Ранее было показано, что внутри фрагмента хромосомы Вас. subtilis размером 3.5 тпн, ограниченного сайтами рестрикции экзонуклеаз EcoRI и BamHI, находится открытая рамка трансляции (ОРТ) длиной 690 пн, по аминокислотному составу частично гомологичная флавокиназам/ФАДсинтазам нескольких микроорганизмов. Фенотипическим выражением данного фрагмента в составе плазмиды pS113 являются остановка конститутивного синтеза рибофлавина у мутантов по гену-регулятору рибофлавинового оперона и увеличение флавокиназной активности [1]. Было высказано предположение, что именно эта ОРТ кодирует белок, определяющий повышение флавокиназной активности. Мы посчитали необходимым субклонировать эту ОРТ и доказать, что именно она кодирует флавокиназу. Это и было целью настоящей работы. В дальнейшем будем называть вышеупомянутую ОРТ геном ribR.

Авторы:

Издание: Генетика
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 6.-С.839-842
Просмотров: 60