ПОЛУЧЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНЫХ ФРАГМЕНТОВ БЕЛКА CagA HELICOBACTER PYLORI

Аннотация:

Создание рекомбинантных фрагментов белка CagA Helicobacter pylori, их очистка и характеристика. Для реализации поставленных задач использованы методы молекулярного клонирования, экспрессии рекомбинантных белков в Escherichia coli, аффинной хроматографии, гельэлектрофореза и вестернблота, а также различные алгоритмы анализа нуклеотидных и аминокислотных последовательностей. Получены 4 рекомбинантных фрагмента белка CagA, содержащих N-терминальный гексагистидиновый мотив. Белок rCagAfr. 1 (65 кДа) представляет наиболее консервативный N-концевой участок цитотоксина. Фрагмент rCagAfr.2 (44 кДа) соответствует центральному консервативному участку CagA, в то время как rCagAfr.3 (39 кДа) представляет высоко вариабельный С-концевой участок CagA. Наконец, бeлoкrCagAfr.4 (75 кДа) включает в себя последовательности rCagAfr.2 и rCagAfr.3. Анализ последовательностей рекомбинантных фрагментов позволяет предположить, что rCagAfr.2 и rCagAfr.4 являются высоко иммуногенными белками. Хроматографическая очистка рекомбинантных полипептидов позволила достичь высокой степени чистоты (97%) и высокого выхода целевых белков (около 15 мг/л культуры). Использование технологии рекомбинантных белков позволило преодолеть проблему получения чистого белка CagA H.pylori, что открывает новые возможности для создания иммунодиагностических тест-систем, направленных на выявление белка CagA или антител против цитотоксина.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2010
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2010.-N 2.-С.74-79. Библ. 10 назв.
Просмотров: 63