КОНСТРУИРОВАНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА КОСМИДНОЙ БИБЛИОТЕКИ ГЕНОВ БАКТЕРИИ Corynebacterium glutamicum АТСС13032

Аннотация:

Сконструирована представительная библиотека генов бактерии Corynehacterium glutamicum АТСС13032 на космидном векторе Lorist6. Космиды содержат вставки бактериальной ДНК, полученные при частичном расщеплении рестриктазой ХамЗА1. Пятьсот тридцать индивидуальных первичных рекомбинантных клонов перенесены и сохраняются в лунках иммунологических планшетов. Средний размер вставок бактериальной ДНК, определенный по сумме размеров рестрикционных фрагментов рекомбинантных молекул, составляет около 38 тпн. Расчетный объем полученной библиотеки генов равен 8.4 эквивалентов генома С. glutamicum, т.е. каждый участок генома представлен в среднем в 8 клонах и присутствует хотя бы в одном клоне с вероятностью >99%. Созданы панели клонов - наборы рекомбинантных клонов, упорядоченно и воспроизводимо нанесенные на фильтры для гибридизации. Специфичность созданной клонотеки и ее представительность подтверждены экспериментально путем гибридизации панелей клонов с ДНК-зондами, соответствующими уникальным областям генома коринебактерии. Среди использованных зондов: плазмида, содержащая ген префенатдегидратазы (pheA)-, олигонуклеотид, соответствующий гену lysC, и 21 РНК-зонд, полученный от концов вставок в различных космидах. Созданный набор клонов пригоден для конструирования космидного контига, перекрывающего геном С. glutumicum, и создания физико-генетической карты на его основе.

Авторы:

Издание: Генетика
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 3.-С.438-441
Просмотров: 62