АНАЛИЗ СТРУКТУРЫ ГЛИКОГЕНА В ГЕПАТОЦИТАХ КРЫС С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЦИТОХИМИЧЕСКОГО И FRET МЕТОДОВ

Аннотация:

С помощью цитохимического и FRET (Forster Resonance Energy Transfer) методов исследовали структуру гликогена в гепатоцитах крыс при голодании и через разные интервалы времени после введения животным глюкозы per os. Гепатоциты на предметных стеклах окрашивали с помощью флуоресцентного варианта PAS-реакции. Окраска препаратов в течение 40 мин бромистым этидием-SO2 (EtBr-SO2) выявляла легкодоступную (ЛД) фракцию, а их последующая окраска аурамином-SO2 (Au-SO2) в течение 50 мин — труднодоступную (ТД) фракцию гликогена в клетках. Общее содержание гликогена (ЛД и ТД) в гепатоцитах на разных этапах рефидинга крыс определяли с помощью цитофлуориметра, а затем в тех же клетках измеряли эффективность FRET. Регистрацию FRET в нескольких участках клеток производили с помощью лазерного сканирующего конфокального микроскопа Leica TCS SP5, используя процедуру FRET АВ (Acceptor Photobleaching). Донором (D) в данной процедуре служил аурамин, а акцептором (А) — бромистый этидий. Показано, что эффективность FRET в ходе рефидинга крыс глюкозой изменяется от 10 до 14 %, при этом структура гликогена оказывает заметное влияние на величину этого показателя. Показано, что в клетках голодных крыс и на ранних сроках после введения животным глюкозы эффективность FRET коррелирует с величиной отношения A/D, которая отражает степень заполнения внешних ярусов молекул гликогена остатками глюкозы. На более поздних сроках рефидинга подобная корреляция либо менее выражена, либо отсутствует. Установлено, что при одном и том же значении A/D эффективность FRET может изменяться в 3—4 раза. Поскольку вероятность передачи энергии от D к А пропорциональна 1/R6, где R — расстояние между D и А, такие колебания эффективности FRET означают, что молекулы гликогена обладают лабильной структурой, в которой цепи гликозидных остатков могут отклоняться от своей оси на расстояние около половины их диаметра.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2011
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2011.-N 7.-С.555-563. Библ. 60 назв.
Просмотров: 84