Исследование степени пролиферации лимфоцитов и экспрессии мРНК генов ИЛ2 и ИЛ2РА в активированных конканавалином А лимфоцитах с помощью ПЦР «в реальном времени»

Аннотация:

Реакция властной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) представляет собой классический метод исследования функциональной активности лимфоцитов. В этой реакции in vitro оценивают степень пролиферации мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) в ответ на различные стимулы с помощью включения меченого 3Н-тимидина в ДНК в сравнении с нестимулированными клетками, однако использование радиоактивной метки ограничивает применение этой методики на практике. Целью работы являлось исследование степени пролиферации мононуклеарных клеток периферической крови с помощью разработанной нами тест-системы на основе ПЦР «в реальном времени» в сравнении с классической методикой с использованием 3Н-тимидина. Маркерами реакции служили гены, активность продуктов которых возрастает при митозе: топоизомеразы II альфа (ген tpa) и белка CDC2 (ген cdc2). В ходе работы с использованием метода ПЦР в режиме «реального времени» была исследована кинетика накопления соответствующих мРНК в процессе стимуляции мононуклеарных клеток периферической крови неспецифическим митогеном конканавалином А (СопА). Также был проведен мониторинг изменения уровня мРНК генов интерлейкина 2 и рецептора интер-лейкина 2aльфа(il2 и il2ra, соответственно). Выявлены значимые различия в кинетике накопления мРНК исследованных генов по сравнению со стимуляцией фитогемагглютинином.Полученные результаты показывают, что мРНК генов tpa и cdc2 может служить надежным маркером пролиферации клеток в РБТЛ, что позволяет создать удобные тест-системы для оценки функциональной активности лимфоцитов in vitro без использования радиоактивной метки, а определение уровня мРНК интерлейкина 2 можно использовать как маркер активации клеток иммунной системы при стимуляции СопА в первые же часы после стимуляции.

Авторы:

Издание: Уральский медицинский журнал
Год издания: 2011
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2011.-N 3.-С.78-85. Библ. 15 назв.
Просмотров: 26