ИЗУЧЕНИЕ РОСТА СТАБИЛЬНЫХ КЛОНОВ МЫШИНЫХ ФИБРОБЛАСТОВ ЛИНИИ СЗН10Т1/2, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ ПРОДУКТ ГЕНА РЕТИНОБЛАСТОМЫ ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Фосфорилирование и дефосфорилирование продукта гена ретинобластомы (pRb) в процессе деления клетки являются необходимым условием прогрессии клеточного цикла. Для изучения роли фосфорилировакия pRb в регуляции клеточной пролиферации могут быть использованы стабильные клеточные линии с конститутивной экспрессией экзогенного белка. С целью получения подобных линий эмбриональные мышиные фибробласты линии СЗН10Т1/2 были инфицированы дефектным ретровирусом, содержащим гены Rb и Neo, последний из которых передавал устойчивость к генитицину (G418). Продукцию pRb и характер его фосфорилирования оценивали путем иммуноблотинга клеточных лизатов, основываясь на известных данных о соответствии между характером фосфорилирования pRb и его электрофоретической подвижностью. Характер фосфорилирования и продукция pRb в клетках опытных линий, полученных в результате селекции на G418 с последующим клонированием, и контрольных клеток, экспрессирующих ген р-галактозидазы, не отличались в тех фазах клеточного цикла, когда белок гиперфосфорилирован. Однако клетки опытных линий значительно быстрее осуществляли дефосфорилирование pRb и накапливали большее количество гипофосфорилированного белка. Изменение характера фосфорилирования или увеличение продукции pRb на отдельных этапах клеточного цикла не влияло на время удвоения клеток. Эти результаты позволяют предполагать, что поддержание физиологического уровня гиперфосфорилирования pRb находится под более строгим контролем и является более важным условием прогрессии клеточного цикла, чем регуляция дефосфорилирования белка. Транскрипционная регуляция деления клетки включает в себя определенные механизмы для связи прогрессии клеточного цикла с различными процессами (терминальную дифференцировку, апоптоз и старение), для каждого из которых необходима предшествующая остановка деления в фазе Gi (Hunter, Pines, 1994; Sherr, 1994). Эта остановка появляется в специфической точке Gi - Gi-рестрикционной точке (РТ), где фокусируются биохимические пути, определяющие начало и последовательность названных процессов. РТ аккумулирует многие афферентные и эффекторные сигналы, специфически фокусирующиеся на продукте гена ретинобластомы (pRb) (Bartek et а1., 1996), который действует как опухолевый супрессор. Авторы некоторых публикаций поддерживают идею о том, что pRb вовлечен в развитие опухолей любого происхождения у человека, возникающих вследствие генной мутации или функциональной дерегуляции pRb (Weinberg, 1995). Микроинъекция функционального pRb останавливает деление клетки в фазе Gi клеточного цикла (Goodrich et а1., 1991), тогда как его инактивация белками ДНК-трансформирующих опухолевых вирусов, такими как Е1А аденовируса, большой Т-антиген вируса SV-40 или белок Е7 вируса папилломы человека, сопровождается неограниченной пролиферацией (DeCaprio et а1., 1988; Whyte et а1., 1988; Dyson et al., 1989).

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 1998
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.152-160
Просмотров: 35