ЗАВИСИМОСТЬ ПРОЦЕССА, ВЕДУЩЕГО К ФОСФОРИЛИРОВАНИЮ БЕЛКА РЕТИНОБЛАСТОМЫ (pRb), ОТ СОСТОЯНИЯ АКТИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА

Аннотация:

Дезорганизация микрофиламентной сети дигидроцитохалазином В (Н^СВ) в середине Gi-фазы клеточного цикла ведет к полному и необратимому блоку продвижения клеток по Gi-фазе и вступления в S-фазу. В связи с тем что критическим моментом в прохождении клетками середины-конца фазы Gi являются синтез специфических для этои фазы циклинов D и Е, образование ими комплексов с циклинзависимыми киназами (Cdk) и активация последних, была изучена возможность влияния филаментного актина на эти процессы. Активность образующихся комплексов оценивали по степени фосфорилирования их специфического субстрата - белка ретинобластомы (pRb). Работу проводили на клетках Swiss ЗТЗ. <Покоящиеся> клетки стимулировали сывороткои или эпидермальным фактором роста (ЭФР). Дезорганизацию актинового цитоскелета осуществляли с помощью НзСВ (10 мкг/мл). Методом иммуноблотинга обнаружены присутствие гипофосфорилированной формы pRb в клетках Swiss ЗТЗ. находящихся в покояшемся состоянии, и появление гиперфосфорилированноН формы белка после стимуляции пролиферации клеток ЭФР или сывороткой. Показано, что разрушение актинового цитоскелета с помощью Н^СВ ведет к ингибированию фосфорилирования pRb. Однако уровень фосфорилирования pRb и степень его снижения при деструкции цитоскелета зависели от глубины исходного состояния покоя (Go) и эффективности митогенной стимуляции клеток. Полученные данные позволяют предположить, что структура актинового цитоскелета имеет важное значение для проведения сигнала, ведущего к транскрипции Е2Р-зависимых генов. Ранее нами было показано, что наиболее актинзависимым периодом фазы Gi является ее середина (Баркан и др., 1996). Добавление Н^СВ блокирует индукцию синтеза ДНК в покоящейся культуре Swiss ЗТЗ только при действии на клетки в период с 8 до 12ч после митогенной стимуляции. Полученные в последние годы сведения о регуляции клеточного цикла свидетельствуют о том, что в продвижении клеток по циклу участвуют такие регуляторные белки, как циклины А, В, D и Е, которые синтезируются и функционируют на определенных этапах митотического цикла (Hunter, Karin, 1992; Dou et al., 1993; Sherr, 1993). Циклины D и Е контролируют прохождение середины-конца фазы Gi. Циклин DI образует комплекс с каталитической субъединицей циклинзависимой киназы 4 (Cdk4), а циклин Е - с циклинзависимой киназой 2 (Cdk2), что приводит к активации последних. Образующиеся комплексы DI-Cdk4 и Е-Cdk2 фосфорилируют pRb. Фосфорилирование pRb является необходимым событием для продвижения клеток из фазы G] в фазу S. Гипофосфорилированная форма pRb связывает и временно подавляет функционирование транскрипционных факторов, среди которых Обнаруживаются транскрипционные факторы семейства E2F (Helin, Harlow, 1992; Sherr, 1994). Фосфорилирование pRb приводит к высвобождению транскрипционного фактора E2F и активации транскрипции генов, контролирующих переход из фазы G) в фазу S (Chellappan et al., 1991; Muller et al., 1994). Таким образом, pRb функционирует как негативный регулятор клеточного цикла в середине-конце фазы Gi. Молекулярные пути, которые связывают митогенный сигнал и продвижение клеток по циклу, достаточно детально изучены, однако пока неясно, каков механизм влияния актинового цитоскелета на эти процессы.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 1998
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.172-177
Просмотров: 47