СОЧЕТАННАЯ АКТИВАЦИЯ ПЛАЗМИНОГЕНА ПОД ДЕЙСТВИЕМ ТКАНЕВОГО АКТИВАТОРА ПЛАЗМИНОГЕНА И КОНЪЮГАТА УРОКИНАЗА-ФИБРИНОГЕН В УСЛОВИЯХ in vitro

Аннотация:

Действенным средством лечения сердечно-сосудистых заболеваний является тромболитическая терапия [1 -5]. Ее совершенствование осуществляется по нескольким направлениям [6], включающим поиск новых лекарственных средств и приемов лечения [7], связанных с развитием "новой биологии" [6]. Именно ее достижения способствовали дальнейшей разработке комбинированной терапии, опирающейся, в частности, на сочетанное введение разных активаторов плазминогена [6, 7]. Благодаря последнему уменьшается величина вводимой дозы лекарства, достигается более быстрый эффект тромболизиса, снижается частота осложнений после него, дешевле становится стоимость курса лечения [8- 12]. Однако схема введения препаратов при этом обычно весьма сложна и осуществима лишь в клинических условиях [13]. Вместе с тем скорейшее оказание лечебной помощи пациентам во многом определяет успех терапии [1, 2, 13]. Достижению внегоспитального лечения способствует разработка новых тромболитических средств с упрощенной схемой введения. Ранее нами был получен препарат урокиназы, модифицированной фибриногеном, - конъюгат урокиназа-фибриноген (УК-Фбг) [14]. УК-Фбг обладал выраженной тромболитической активностью [15] и пролонгированным пребыванием в организме [16]. Более того, при болюс-инфузия-болюсной схеме введения УК-Фбг вместе с рекомбинантным тканевым активатором плазминогена (ТАП) обнаружено ускорение действия (эффект быстродействия) этой тромболитической композиции на модели венозного тромбоза у собак [17]. Полученные данные свидетельствуют об актуальности изучения тромболитической композиции на основе ТАП и УК-Фбг как потенциального тромболитика быстрого действия. Для экспериментального обоснования целесообразности и возможности упрощения схемы введения названного сочетания in vivo мы провели исследование фибринолитической активности этой тромболитической композиции in vitro. Экспериментальная часть Были использованы препарат рекомбинантного ТАП (Dr. K.arl Thomae, Германия, содержание активатора в препарате 2 %) и ковалентный конъюгат УК-Фбг (20000 Ш/мг препарата), полученный по [14] на основе коммерческого препарата нативной урокиназы (Japan Chemical Research, Япония) и фибриногена человека (Sigma, США). Расчет доз ТАП и УК-Фбг вели по активному началу. Плазминоген и тромбин человека, компоненты буферных растворов были производства фирмы Sigma (США). Определение фибринолитической активности in vitro. Фибринолитическую активность активаторов плазминогена исследовали в модельной системе, разработанной нами ранее [14]. Суть метода сводится к следующему. В пластмассовой трубке, одно из отверстий которой затянуто полупроницаемой сеткой, формируется фибриновый сгусток. Трубка со сгустком затем помещается над поверхностью омывающего буферного раствора (поверхность последнего касается сетки с расположенным на ней фибриновым сгустком). В омывающем растворе находятся плазминоген и его активаторы. При инкубации системы при комнатной температуре происходит лизис фибринового сгустка, деградированные фрагменты которого переходят из трубки через мембрану-сетку в омывающий раствор. Периодически из последнего отбирают пробы и измеряют их абсорбцию при 280 нм. Прирост оптический плотности раствора за единицу времени (пропорциональный скорости фибринолиза) вместе со временем полного растворения сгустка (когда величина прироста оптической плотности принимается за 100 %) являются параметрами, характеризующими фибринолиз в условиях: 0,05 М Na-фосфатный буфер, рН 7,5, комнатная температура. Формирование фибринового сгустка проводили в вертикальных пластмассовых трубочках с полупроницаемой сеткой в нижней части, закрытой пленкой парафилма. В трубочках в течение 1 ч при комнатной температуре инкубировали 0,5 мл раствора фибриногена (Фбг) (Юмг/мл) и 0,2 мл раствора тромбина (Тб) (50 U NIH/мл). Во всех случаях в качестве растворителя использовали 0,05 М Na-фосфатный буфер, рН 7,5. При оценке сорбции ТАП на фибрине сгусток получали, используя растворы Фбг (4,5 мг/мл) и Тб (30 U NIH/мл). В омывающем буферном растворе (0,05 М Na-фосфат, рН 7,5) содержались, в зависимости от назначе

Авторы:

Издание: Химико-фармацевтический журнал
Год издания: 1998
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 1998.-N 4.-С.3-7
Просмотров: 61