ДИФФЕРЕНЦИРОВКА МЫШЕЧНЫХ ВОЛОКОН МЫШЕЙ MDX ПОСЛЕ БАЛЛИСТИЧЕСКОЙ ТРАНСФЕКЦИИ кДНК ГЕНА ДИСТРОФИНА ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Изучали изменения средней [пощади поперечных срезов (в мкм^), периметра, наименьшего и наибольшего диаметров (в мкм) мышечных волокон М. rectus femoris (центральная ветвь М. quadriceps) мышей MDX через 2 и 3 нед и 2 мес после баллистической трансфекции (БТ) плазмидами pHSADy и pVMMDys, содержащими кДНК полного генадистрофина человека. Экспрессию дистрофина определяли иммунопероксидазным методом при помощи антител Р6 к род-домену дистрофина и кроличьего комплекса пероксидаза-антипероксидаза на поперечных криостатных срезах М. quadriceps. По характеру локализации дистрофина мышечные волокна были разделены на 2 типа - типичные, экспрессирующие дистрофин в виде кольца, и атипичные, экспрессируюшие дистрофин по всей площади волокон. Показано, что экспрессия дистрофина приводит к достоверному увеличению средней площади волокон по сравнению с площадью дистрофиннеэкспрессируюших волокон этой же мышцы. Увеличение площадей происходит и у волокон контрлатеральной мышцы, также экспрессирующих дистрофин. После начала экспрессии дистрофина экцентриситет волокон не изменялся и колебался в пределах от 1.3 до 1.7. Ядра дистрофин-положительных волокон сохраняли центральное положение, и это указывает на то, что экспрессия дистрофина не нормализует полностью дифференцировку волокон мышей MDX. Доля цельноокрашенных дистрофин-положительных волокон увеличивается от 27+10 % через 2-3 нед после БТ до 82+4 % через 2 мес после БТ, что свидетельствует о нерегулируемой экспрессии трансфицированного гена. Многие цельноокрашенные миофибриллы дегенерируют. Сделан вывод о том, что БТ позволяет эффективно трансфицировать гены в клетки мышей MDX. Однако экспрессия кДНК гена дистрофина человека в волокнах поперечнополосатых мышц мышей MDX не приводит к их законченной и стабильной дифференцировке. Одним из способов изучения механизмов клеточного развития является анализ влияния мутаций, нарушающих структуру клеточных белков, на цитодифференцировку. Примером подобного анализа может быть изучение дифференцировки поперечнополосатых мышечных клеток, лишенных в результате мутации белка дистрофина. Дистрофин относится к цитоскелетным белкам суперсемейства спектрина (Коenig et а1., 1988). Он локализуется в цитоплазме под клеточной мембраной. Показано, что в поперечнополосатых мышцах С-часть молекулы дистрофина при участии гликопротеидов (дистрогликанов и саркогликанов) устанавливает связь между ламинином и саркоплазмой, тогда как центральная часть молекулы род-домен - и NHi-часть молекулы дистрофина связываются с актином (Chamberlain et а1., 1997). Таким образом, дистрофин составляет часть пути передачи сигнала с экстраклеточного матрикса на цитоскелет. Кроме того, присутствие дистрофина в мышечном волокне необходимо для стабилизации связи пучков сократительных филаментов с саркоплазматической мембраной (Ervasti, Campbell, 1993). Влияние отсутствия дистрофина на дифференцировку поперечнополосатых мышц наиболее подробно изучено у людей с миодистрофией Дюшенна и Беккера (Dunckley et а1., 1995). Экспериментальной моделью заболевания человека являются мыши MDX, у которых вследствие точечной мутации гена отсутствует синтез

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 1998
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 1998.-N 5.-С.394-400
Просмотров: 86