МЕТОД ПОДГОТОВКИ ПРОБ ДЛЯ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИРНЫХ КИСЛОТ БЕЗ ПРЕДВАРИТЕЛЬНОЙ ЭКСТРАКЦИИ ЛИПИДОВ

Аннотация:

Составной частью современного диагностического процесса можно считать аналитическое определение концентраций жирных кислот (ЖК) в разных биологических средах с целью диагностики нарушений их переноса, поглощения клетками и метаболизма при патологических состояниях. Объектами аналитической процедуры являются полярные и неполярные липиды, отдельные классы липопротеинов, плазматические мембраны клеток и субклеточных органелл, плазма крови, эритроциты и лейкоциты, липиды атероматозных бляшек, биоптаты подкожной жировой ткани. Методы определения подобных объектов остаются весьма трудоемкими и методически сложными. Несмотря на это, они являются частью многих экспериментальных и клинических протоколов; особые затруднения обычно вызывает процедура первичной физико-химической подготовки проб, которая мало изменилась за последние полвека. Количественное определение состава ЖК биологических сред начинается с экстракции липидов и концентрирования экстракта. Наиболее часто извлечение липидов из матричного материала проб проводят по методу Фолча: он включает экстракцию из биологического образца, в том числе и гомогената ткани, 6—10-кратным объемом смеси хлороформа с метанолом в отношении 2:1, промывание органического экстракта изотоническим NaCl или КС1 и концентрирование его в вакууме. Предложено также использовать смеси спиртов и углеводородов для экстракции липидов и ЖК из биологических образцов. Выход липидов при их экстракции по методу Фолча в оптимальных условиях составляет 85—95%, однако его величина ощутимо зависит от эффективности гомогенизации и особенностей исследуемого материала. Кроме того, следует иметь в виду, что часть ЖК ковалентно связана в составе гликолипидов и протеолипидов: упомянутые липиды принципиально не могут быть извлечены органическим растворителем в ходе экстракции по Фолчу, их не удается перевести в метиловые эфиры и определить методом газовой хроматографии. Экстракция липидов по Фолчу часто приводит к образованию трудно расслаивающейся трехфазной системы водный метанол — хлороформ — мелкодисперсный твердый биологический материал; обычно требуется длительное (многочасовое) отстаивание или применение процедур фильтрования или эффективного центрифугирования. Длительные операции с разбавленными растворами липидов в органических растворителях всегда сопровождает частичное окисление двойных связей в составе эссенциальных полиеновых ЖК и последующая окислительная полимеризация ненасыщенных ЖК и липидов; использование же низких температур, инертных атмосфер и предварительно дегазированных растворителей значительно осложняет препаративную процедуру. Цель работы — упростить метод предварительной подготовки проб для газохроматографического определения ЖК.

Авторы:

Издание: Клиническая лабораторная диагностика
Год издания: 2012
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2012.-N 1.-С.3-6. Библ. 16 назв.
Просмотров: 392