КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ИНДУЦИБЕЛЬНЫХ СИСТЕМ КЛЕТОК Escherichiacoli И Bacillus subtilis РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

Аннотация:

Показана возможность применения метода RIA dot-blot для качественной и количественной характеристики механизмов действия различных индуцирующих агентов на клетки Escherichia coli. Установлены количественные различия в исходных уровнях белков важнейших для жизнедеятельности клетки систем, SOSрепарации и белков теплового шока, белков RecA и GroEL в различных штаммах Е. coli, а также принципиальная возможность использования полученных антител, обладающих высокой специфичностью к названным белкам, для исследования реакции упомянутых систем у других бактерий (Вас. subtilis). Иммунологические методы прочно вошли в арсенал современных лабораторных исследований индуцибельных систем клеток Е. coli [1-3]. Обилие методических вариантов свидетельствует, что не всегда необходимо придерживаться одной схемы в проведении конкретного исследования, иногда целесообразно учитывать возможности экспериментаторов и качество используемых реагентов. Методы, основанные на применении твердофазных носителей, в частности целлюлозы, привели к существенному удешевлению экспериментов. В нашем случае, за исключением у-счетчика, позволяющего осуществлять количественную регистрацию результатов, метод RIA dot-blot не требует другого сложного оборудования. Отметим еще ряд достоинств иммунологических методов. Так, перекрестная реактивность антител вследствие фиксации на твердой фазе не претерпевает существенных изменений, а адсорбция сывороточных белков приводит к тому, что те из них, которые обладают ингибирующей или протеолитической активностью, оказываются не в состоянии влиять на результаты. Поэтому на один эксперимент расходуется небольшое количество сыворотки. Это важно при работе со слабоиммуногенными веществами, для которых получение антисыворотки представляет известные трудности, так как конкурентная реакция протекает при концентрациях порядка нанограмм, а преципитация - микрограмм вещества. Метод двойных антител, при котором происходит выделение иммунного комплекса за счет второй сыворотки (в нашем случае протеина A, Prot А), обладает очень высокой воспроизводимостью, хотя и требует несколько большего времени для проведения эксперимента.

Авторы:

Издание: Радиационная биология.Радиоэкология
Год издания: 1998
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 1998.-N 1.-С.495-501
Просмотров: 28