Пролиферация и дифференцировка предшественников миелоидного ростка кроветворения пуповинной крови человека при экспансии in vitro

Аннотация:

Исследованы закономерности пролиферации и дифференцировки в миелоидном направлении CD34+-популяции клеток пуповинной крови человека при экспансии in vitro над монослоем мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга (ММСК КМ) и без него в бессывороточной среде под воздействием рекомбинантных факторов IL-3, IL-B, SCF и Flt3/1. Из пуповинной крови здоровых рожениц (n = 4) выделяли фракцию мононуклеарных клеток (МК), часть которой обогащали CD34+ клетками, методом положительной иммуномагнитной сепарации (CD34o6). Экспансию in vitro обеих фракций проводили в течение 2 нед. По мере роста клетки рассевали на новые площади. Экспрессию CD34 и CD45 определяли методом проточной цитофлуориметрии, субпопуляции миелоидных предшественников — колониео-бразующим тестом. За две недели культивирования количество CD34+ клеток фракции МК увеличилось в 70±29 раз без подложки и в 980±414 раз на подложке. Прирост CD34 < клеток в CD34o6 фракции достоверно не отличался от такового в МК. В течение первой недели экспансии субпопуляционный состав предшественников не менялся, на второй неделе — гранулоцитопоэз превалировал над эритропоэзом. Мониторинг экспрессии CD34 и CD45 показал существование двух популяций кроветворных клеток, одна из которых теряет CD34 на первой неделе экспансии, другая — только на второй. Подложка ММСК КМ способствует достоверно большему Ср < 0,05) увеличению количества CD34+ клеток и колониеобразующих единиц в сравнении с вариантами культивирования без подложки и вызывает их перераспределение между суспензионной и адгезированной фракциями клеток. С ММСК связываются преимущественно либо эритроидные, либо мультипотентные предшественники. Для экспансии мультипотентных предшественников миелоидного ряда оптимальным является культивирование CD34o6 фракции клеток на подложке ММСК КМ в период до одной недели со средней кратностью увеличения ядро-содержащих клеток — 5Б±32 раз, CD34f клеток — ЗВ±15 раз, мультипотентных предшественников — 45± 18 раз, всех КОЕ - В0± 11 раз.

Авторы:

Издание: Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии
Год издания: 2012
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2012.-N 530.-С.40-48. Библ. 24 назв.
Просмотров: 68