ЦИРКУЛЯРНАЯ ПЕРМУТАЦИЯ РИБОСОМНОГО БЕЛКА S6 ИЗ Thermus thermophilus С ЦЕЛЬЮ ПРИДАНИЯ ЕМУ ТОПОЛОГИИ ИСКУССТВЕННОГО БЕЛКА АЛЬБЕБЕТИНА

Аннотация:

Проведена циркулярная пермутации рибосомного белка S6 из Thermus thermophilus с целью получения природного белка с уникальной топологией, предложенной ранее для альбебетина - искусственного белка с заданной пространственной структурой. Ген S6 клонирован, секвенирован и модифицирован таким образом, что участок, соответствующий первому Р-стрэнду белка, занял С-концевое положение. Пермутированный белок получен в двух экспрессирующих системах, очищен и исследован методами спектроскопии кругового дихроизма, флуоресцентной спектроскопии, ядерного магнитного резонанса и сканирующей микрокалориметрии. Показано, что пермутированный S6 обладает близкой к расчетной вторичной структурой, а также жесткой и стабильной третичной структурой, характерной для нативных природных белков. Ранее был сконструирован и получен искусственный белок альбебетин [1, 2] с заданной пространственной структурой типа (хррофр (две <-спирали, лежащие на (З-листе) и уникальной топологией, не наблюдавшейся в природных белках (рис. 1), но и не противоречащей никаким известным законам формирования белковых структур. Исследования альбебетина с помощью различных физико-химических методов показали, что он обладает компактной и относительно стабильной структурой, похожей на первоначально заданную [2, 3], но находится скорее в состоянии расплавленной глобулы [4], чем в состоянии, соответствующем нативному состоянию природных белков. Можно предположить две возможные причины отсутствия у данного искусственного белка жесткой пространственной структуры: неплотная упаковка боковых групп внутри молекулы, возникающая в силу некоторых неточностей дизайна, и противоречие топологии альбебетина каким-либо еще неизвестным законам формирования белковых структур, приводящее к тому, что нативный белок с такой топологией невозможно получить вообще. При выяснении вопроса о принципиальной возможности получения сконструированной топологии было решено провести пермутацию природного белка с жесгкой третичной структурой, имеющего сходное с альбебетином расположение элементов вторичной структуры в пространстве, для придания ему альбебетин-подобной топологии. В качестве данного природного белка был выбран рибосомный белок S6 из Thermus thermophilus [5]. Таким образом, целью настоящей работы было получение и исследование циркулярно пермутированного рибосомного белка S6.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 1998.-N 1.-С.125-132
Просмотров: 101