ОДНА ИЗ ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ КИНЕЗИНА ИЗБИРАТЕЛЬНО АССОЦИИРОВАНА С МИТОХОНДРИЯМИ

Аннотация:

Молекула кинезина, моторного белка, ответственного за внутриклеточный транспорт по микротрубочкам, состоит из двух тяжелых и двух легких цепей. Поскольку легкие цепи локализованы на противоположном от моторного домена конце молекулы, считается, что они участвуют в связывании переносимого кинезином груза. Тот факт, что легкие цепи представлены несколькими изоформами, дает основание предположить, что за транспорт различных органелл отвечают различные изоформы. В настоящей работе исследовали роль легких цепей в связывании кинезина с переносимым грузом. Из белок-синтезирующей клонотеки кДНК культивируемых клеток эпителия яйцевода китайского хомячка линии СНО-К1 при помощи антител, специфически узнающих все изоформы легких цепей кинезина, выделено пять клонов, кодирующих различные изоформы. С-концевой фрагмент одной из изоформ был синтезирован в бактериях и использован как антиген для получения изоформоспецифических антител. Полученные антитела, названные анти-В, узнавали только один полипептид в гомогенате фибробластов кожи человека и печени крысы. Методом иммунофлуоресценции показано, что эти антитела окрашивают митохондрии в культивируемых фибробластах. При выделении митохондрии из печени крысы с ними в основном соочищается только одна легкая цепь кинезина, узнаваемая антителами анти-В. Таким образом, одна из легких цепей кинезина избирательно ассоциирована с митохондриями. Важнейшую роль во внутриклеточном транспорте органелл играют ассоциированные с микротрубочками белки-транслокаторы - механохимические АТРазы, способные превращать энергию гидролиза АТР в механическое перемещение субклеточных структур по микротрубочкам. Одним из таких моторных белков, осуществляющих транспорт органелл от центра клетки к ее периферии, является кинезин [1]. Молекула кинезина представляет собой гетеротетрамер, образованный двумя тяжелыми и двумя легкими цепями, молекулярная масса которых у различных организмов варьирует в пределах 110-135 кДа и 58-76 кДа соответственно [2]. Механохимическая активность кинезина связана с его тяжелой цепью, N-концевой глобулярный домен которой обладает АТРазной активностью и взаимодействует с микротрубочками [3]. Этот моторный домен соединяется через (х-спиральный стержень с С-концевым глобулярным доменом, который способен связывать фосфолипидные мембраны in vitro и in vivo [4, 5]. Тяжелая цепь кинезина способна как взаимодействовать с микротрубочками АТР-зависимым способом, так и связывать органеллы. Предполагают поэтому, что легкие цепи кинезина выполняют регуляторные функции. Легкие цепи локализованы в "хвостовом" участке молекулы кинезина, противоположном моторным "головкам" [6]. Это обстоятельство, а также то, что эти субъединицы представлены множественными изоформами [710], дает основание предположить, что легкие цепи кинезина опосредуют избирательное взаимодействие мотора с тем или иным видом переносимых "грузов" [6]. Результаты, полученные с использованием антител к моторному домену тяжелой цепи кинезина, свидетельствуют об его участии в транспорте и распределении самых разных цитоплазматических структур, таких как лизосомы в легочных макрофагах мыши [II], пигментные гранулы в меланофорах рыб [12], митохондрии в фибробластах человека [13], виментиновые промежуточные филаменты в культивируемых клетках [14]. Вместе с тем транспорт каждого вида органелл должен регулироваться особо. Поэтому необходимо участие специфических адаптеров, определяющих взаимодействие моторного белка с той или иной органеллой.

Авторы:

Издание: Молекулярная биология
Год издания: 1998
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 1998.-N 1.-С.154-161
Просмотров: 32