СВОЙСТВА РЕКОМБИНАНТНОЙ АТР-ЗАВИСИМОЙ ФРУКТОКИНАЗЫ ГАЛОТОЛЕРАНТНОГО МЕТАНОТРОФА Methylomicrobium alcaliphilum 20Z

Аннотация:

В кластере генов синтеза и распада сахарозы у Methylomicrobium alcaliphilum 20Z обнаружен ген, продукт которого проявлял сходство с сахарокиназами семейства рибокиназ. Гетерологичной экспрессией этого гена в клетках Escherichia coli с последующей аффинной металл-хелатной хроматографией получен электрофоретически гомогенный препарат рекомбинантного белка с шестью остатками His на С-конце. Фермент катализировал АТР-зависимое фосфорилирование фруктозы до фруктозо-6-фосфата, но был неактивен с другими моносахаридами в качестве акцепторов фосфорильной группы. Фруктокиназа М. alcaliphilum 20Z наиболее активна в присутствии Мп2+ при рН 9,0 и 60°, ингибируется ADP (К{ = 2,50 ± 0,03 мМ). Кажущиеся константы Михаэлиса для фруктозы и АТР составляли 0,26 и 1,3 мМ соответственно, максимальная активность 141 Е/мг белка. По аминокислотной последовательности фермент проявлял наибольшее сходство с предполагаемыми фруктокиназами из метилотрофных и автотрофных протеобактерий, у которых ген fruK расположен в генном кластере, кодирующем ферменты синтеза сахарозы. Обсуждается связь фруктокина-зы с метаболизмом сахарозы у М. alcaliphilum 20Z и других метанотрофов и автотрофов.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2012
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2012.-N 4.-С.474-480. Библ. 22 назв.
Просмотров: 32