ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА КОНФОРМАЦИОННОГО ПОЛИМОРФИЗМА ОДНОЦЕПОЧЕЧНЫХ ФРАГМЕНТОВ ДНК (SSCP) ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ MYCOPLASMA HOMINIS К ФТОРХИНОЛОНАМ

Аннотация:

В работе использован метод конформационного полиморфизма (SSCP) для анализа вариаций района, определяющего устойчивость к хинолонам (QRDR gyrA) лабораторного штамма Mycoplasma liominis и выделенного из клинических изолятов. Выбранная пара праймеров к указанному району M.liominis позволяла амплифицировать специфический продукт непосредственно из клинических образцов. С помощью метода SSCP проанализированы культуры М. hominis, растущие на разных концентрациях ципрофлоксацина, и показано, что описанная ранее мутация Ser(83)-Leii обнаруживается в культурах, которые растут при концентрации препарата 10 мкг/мл и выше. Кроме того, проанализировано 11 клинических изолятов. Во всех случаях результаты SSCP подтверждались данными прямого определения нуклеотидной последовательности. В 2 случаях последовательности QRDR gyrA М. liominis клинических изолятов и лабораторного штамма совпадали. В 1 случае была идентифицирована мутация Ser(83)-Leii, в остальных нуклеотидные замены не приводили к изменениям в аминокислотной пЬеледовательности исследуемого района. Полученные результаты демонстрируют высокую информативность метода SSCP и возможность использования при анализе QRDR gyrA клинических изолятов М. hominis. Молликуты (микоплазмы) - наиболее прос устроенные прокариоты, способные к самосто тельному делению [8]. Как правило, являясь пар зитами растений, животных или птиц, эти микр организмы вызывают воспалительные заболев ния слизистых покровов и(или) хроническую г нерализованную инфекцию с аутоиммунными о ложнениями [6]. Наиболее активными антибакт риальными агентами при лечении микоплазмоз или смешанных инфекций с участием этих ми роорганизмов являются тетрациклины. Однако последнее десятилетие отмечен значительны рост резистентных к тетрациклинам клиническ: штаммов микоплазм [10]. В частности, клинич ские эпидемиологические исследования выявит увеличение частоты встречаемости ассоциирова ной с тетрациклинрезистентностью tetM-детерм нанты в клинических изолятах М. hominis и, к. следствие, возрастание на несколько порядк' MIC тетрациклина и его производных для клинических изолятов этого вида микоплазм. В связи со сказанным выше определенное клиническое значение приобретают антибактериальные препараты другого механизма действия, такие, например, как фторхинолоны. В работах [1, 2] показано, что резистентные к фторхинолонам изоляты М. hominis имели мутацию Ser(83)-Leu (QRDR-локус ДНК-гиразы). Ранее подобная мутация и ряд других были обнаружены у широкого спектра резистентных к фторхинолонам микроорганизмов [5, 9, II]. Роль указанных мутаций в обеспечении резистентности к фторхинолонам продемонстрирована на примере Е. coli [12]. Целью нашего исследования являлась разработка быстрого метода определения мутаций в QRDRлокусс гена ДНК-гиразы клеток М. hominis непосредственно в клинических образцах.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 4.-С.37-40
Просмотров: 104