ПОЛУЧЕНИЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА OprF-OprI PSEUDOMONAS AERUGINOSA

Аннотация:

Цель. Получение препарата, состоящего из аминокислотных последовательностей двух белков наружной мембраны OprF и OprI P. aeruginosa и изучение его защитных свойств от экспериментальной синегнойной инфекции. Материалы и методы. Нуклеотидные по-следовательности, кодирующие белок OprF (1 kb), а также его С-концевую область (0,6 kb) и белок OprI (0,25 kb), встроены в плазмиду pQE-30 (QIAGEN). При этом ген oprF (С-концевая область oprF во втором варианте) и ген oprl были объединены и клонированы последовательно в одном векторе. При получении штаммов-продуцентов рекомби-нантных белков использованы клетки Escherichia coli штамма Ml5 (QIAGEN). Белковые продукты анализировали электрофорезом в полиакриламидном геле по методу Лэммли. Очистку рекомбинантных белков осуществляли методом аффинной хроматографии в колонках с Ni-сефарозой. При анализе защитных свойств рекомбинантных белков использовали живую вирулентную культуру P. aeruginosa штамм РА-170015. Результаты. Получены два гибридных рекомбинантных белка, включающих аминокислотные последовательности белков F и I наружной мембраны (OprF и OprI) P. aeruginosa. Первый ре-комбинантный белок включал полноразмерные последовательности OprF и OprI, а второй С-концевую область (включающая 192-342 аминокислотные остатки) OprF и полноразмерную последовательность OprI. Эти рекомбинантные белки в результате двукратной иммунизации защищали мышей от экспериментальной внутрибрюшинной инфекции Р. aeruginosa. Наилучшим защитным эффектом обладал гибридный белок, состоящий из полноразмерных последовательностей. Заключение. Полученные результаты открывают перспективу для дальнейшего иммунобиологического тестирования гибридного реком-бинантного белка OprF-OprI с целью создания иммунопрепарата для профилактики синегнойной инфекции.

Авторы:

Издание: Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии
Год издания: 2012
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2012.-N 3.-С.35-43. Библ. 7 назв.
Просмотров: 60