ВЫДЕЛЕНИЕ И КЛОНИРОВАНИЕ ГЕНА АНТИГЕНА ВИРУСА ГЕПАТИТА ДЕЛЬТА. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ ДЕЛЬТА- ИНФЕКЦИИ

Аннотация:

Ген антигена вируса гепатита дельта (ВГД) выделен из сыворотки крови инфицированного ВГД больного с использованием реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. Полученная кДНК. гена антигена ВГД клонирована в экспрессивные векторы Е. coli. Показана высокая экспрессия рекомбинантного антигена в бактериях. Установлена одновременная экспрессия малой и большой форм антигена ВГД в бактериальных штаммах, несущих siipE-мутацию. Разработана лабораторная методика выявления антител к ВГД в крови пациентов, основанная на использовании малой и большой форм рекомбинантного антигена ВГД, иммобилизованных на одном мембранном фильтре. Методика может быть использована для создания оригинальной тест-системы повышенной специфичности. Вирус гепатита дельта (ВГД) - сателлитный вирус, репродукция которого поддерживается вирусом гепатита В (ВГВ) [10, II]. Сферические частицы диаметром 36 нм состоят из поверхностного белка, поставляемого вирусом-помощником, и внутреннего нуклеопротеида, в состав которого входит геномная антисмысловая РНК, ассоциированная с вирусспецифическим белком - антигеном гепатита дельта (HDAg) [4, 16]. Хотя вирусный геном кодирует единственный белок, в инфицированных гепатоцитах обнаруживаются 2 формы HDAg: малая, размером 24 кД, и большая, размером 27 кД [3]. В процессе специфического редактирования РНК терминирующий кодон трансляции малой формы UAG замещается на кодон UGG, кодирующий триптофан. Такая замена приводит к удлинению открытой рамки считывания малой формы HDAg на 19 дополнительных триплетов и образованию открытой рамки считывания большой формы HDAg [5]. Несмотря на сходство аминокислотных последовательностей форм HDAg, их функции в репродуктивном цикле вируса совершенно различны. Малая форма HDAg необходима для репликации вирусной РНК [9], большая форма подавляет репликацию [6] и инициирует самосборку вирусных частиц [13]. С клинической точки зрения, ВГД является возбудителем тяжелого заболевания печени. Коинфекция, вызванная ВГД и ВГВ, часто приводит к фульминантным гепатитам; ВГД-суперинфекция у больных гепатитом В - к хроническому гепатиту и развитию гепатокарциномы [1, 12]. С учетом неблагоприятного прогноза, связанного с ВГД-инфекцией, своевременная диагностика заболевания приобретает особенно важное значение. Цель настоящей работы заключалась в выделении и клонировании гена антигена вируса гепатита дельта российской популяции и в изучении возможности использования полученного рекомбинантного HDAg для серодиагностики гепатите дельта.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 1998
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.29-32
Просмотров: 69