ВЫДЕЛЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ НОВЫХ ЭНДОНУКЛЕАЗ РЕСТРИКЦИИ Bsp40091 И Asil, ИЗОШИЗОМЕРОВ ВАМН1

Аннотация:

В клетках Azotobacter species 55 и Bacillus species 4009 обнаружены новые эндонуклеазы рестрикции II класса Asil и Bsp40091 соответственно. С использованием колоночной хроматографии на фосфоцеллюлозе и гепарин-сефарозе (Asil) или фосфоцеллюлозе и ДЭАЭ-целлюлозе (Bsp40091), были получены очищенные препараты эндонуклеаз, не содержащие примесей интерферирующих нуклеаз и фосфатаз. Выход эндонуклеаз Asil и Bsp40091 составил соответственно 16-10^ и 8-10^ ед. активности на 1 г биомассы. Установлено, что Asil и Bsp40091 узнают на двунитевой ДНК нуклеотидную последовательность 5'-G-lrGATCC-3' и расщепляют ее, как указано, являясь истинными изошизомерами эндонуклеазы BamHI. К настоящему времени описано около 3000 эндонуклеаз рестрикции II класса [13], получивших широкое использование в технологии рекомбинантных ДНК, структурно-функциональном изучении нуклеиновых кислот и исследовании белокнуклеинового узнавания. Неослабевающий интерес к поиску новых эндонуклеаз рестрикции во многом объясняется необходимостью обнаружения таковых с ранее неизвестной специфичностью действия (прототипов), а также более активных продуцентов эндонуклеаз-изошизомёров, стремлением исследовать закономерности распространения этих ферментов у прокариотических организмов. Ранее нами был обнаружен ряд штаммов-продуцентов новых эндонуклеаз рестрикции, в том числе у представителей родов Achromobacter [4], Bacillus [5, 8, II, 12, 16], Lactobacillus [4], Pseudomonas [3, 15]. Цель настоящей работы - выделение, очистка и установление специфичности действия двух новых сайт-специфических эндонуклеаз, продуцируемых штаммами A. species 55 и В. species 4009.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 1998
Объем: 3с.
Дополнительная информация: 1998.-N 2.-С.32-34
Просмотров: 27